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上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限...

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面粉中嘔吐毒素檢測(cè)實(shí)驗(yàn)全解析

閱讀:3868      發(fā)布時(shí)間:2016-8-22
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嘔吐毒素主體成分為DON(deoxynivalenol, 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇),屬于單端孢霉烯族化合物,主要由禾谷鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌、擬枝孢鐮刀菌、粉紅鐮刀菌、雪腐鐮刀菌等鐮刀菌產(chǎn)生。因?yàn)樵摲N物質(zhì)可以引起豬產(chǎn)生嘔吐癥狀,故命名為嘔吐毒素。常見(jiàn)于大麥,小麥,玉米等谷物飼料中;嘔吐毒素對(duì)人和動(dòng)物均有很強(qiáng)的毒性,能引起人和動(dòng)物嘔吐、腹瀉、皮膚刺激、拒食、神經(jīng)紊亂、流產(chǎn)、死胎等,豬是對(duì)嘔吐毒素zui敏感的動(dòng)物。

 

上海安譜公司使用美國(guó)beacon 嘔吐毒素免疫親和柱以及美國(guó) O2SI 的標(biāo)準(zhǔn)品參照GBT 23503-2009 的方法檢測(cè)面粉中的嘔吐毒素,并對(duì)其中注意點(diǎn)進(jìn)行全面解析,給客戶提供一個(gè)完整的解決方案。

 

一:樣品前處理

稱取10g 面粉加入100ml 水,高速均質(zhì)1 分鐘,用玻璃纖維濾紙過(guò)濾至澄清,取2ml 濾液作為待上樣液。

 

二:檢測(cè)前的準(zhǔn)備和注意事項(xiàng)

1. 將所需的免疫親和柱在使用前回溫至室溫(20-25℃)。

2. 免疫親和柱的上下端有塑料塞子,在使用時(shí)可以取下。

3. 在使用的過(guò)程中避免免疫親和柱的干燥。例外情況為洗脫前短暫的排空和洗脫后的*排空

4. 過(guò)高的壓力或真空提取設(shè)備產(chǎn)生的負(fù)壓會(huì)壓緊凝膠而導(dǎo)致回收率降低。

 

三:小柱操作過(guò)程

• 將5ml 或10ml 注射器連接于免疫親和柱上端(通過(guò)小柱連接件)。

• 2ml 處理好的樣品液以1-2 滴/ 秒的速度通過(guò)親合柱,棄掉流出的液體。

• 以5ml 水淋洗柱子一次,棄掉流出的液體。

• 利用真空設(shè)備壓入空氣(約10 秒),確保排除所有的液體。

• 用1ml 甲醇緩慢洗脫(流速約為2-3 秒每滴),殘留的洗脫液使用空氣壓出或真空抽出(30 秒)并將洗脫液收集于干凈的收集管中。

• 將洗脫液吹干后加入1ml 流動(dòng)相復(fù)溶,用于液相色譜檢測(cè)。

 

四:液相方法

色譜柱:C18-wp 150*4.6mm,5um

流動(dòng)相: 甲醇:水=20:80

流速:1mL/min

柱溫:35℃

進(jìn)樣量:50uL

檢測(cè)波長(zhǎng):218nm

 

五:實(shí)驗(yàn)譜圖

 

圖一:面粉500ppb 加標(biāo)

 

圖二:面粉基質(zhì)空白

 

圖三:500ppb 標(biāo)準(zhǔn)譜圖

 

六:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

面粉                             樣品1                 樣品2

500ppb 加標(biāo)回收率      94.2%                80%

 

七:實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

認(rèn)錯(cuò)峰,誤認(rèn)為回收率為0

95% 乙酸乙酯做溶劑的嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品譜圖

VS

純甲醇做溶劑的嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品譜圖

 

真相

客戶把標(biāo)準(zhǔn)品里面的溶劑乙酸乙酯誤認(rèn)成嘔吐毒素的峰。從對(duì)比圖可看出:95% 乙酸乙酯做溶劑的標(biāo)準(zhǔn)品會(huì)帶來(lái)認(rèn)錯(cuò)峰的干擾。

一方面因?yàn)樵搶?shí)驗(yàn)色譜條件中檢測(cè)波長(zhǎng):218nm;而乙酸乙酯的紫外截止波長(zhǎng)為256nm,這意味著,乙酸乙酯在218nm 的波長(zhǎng)下,照樣會(huì)有吸收,就算200ug/mL(200ppm)的濃度稀釋到1ppm,其中乙酸乙酯的濃度會(huì)達(dá)到4750ppm;這樣子標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣的時(shí)候乙酸乙酯會(huì)在液相色譜有一個(gè)很大的吸收,相對(duì)而言1ppm 的嘔吐毒素顯得很小,客戶很容易誤認(rèn),后來(lái)客戶用乙酸乙酯進(jìn)樣驗(yàn)證確實(shí)是乙酸乙酯的峰。

另外一方面嘔吐毒素的化學(xué)結(jié)構(gòu),共軛體系不強(qiáng),只有一個(gè)碳碳雙鍵和羰基共軛,這樣子在218nm 下吸收不強(qiáng),導(dǎo)致其相對(duì)乙酸乙酯的峰來(lái)說(shuō),峰型很小,容易被客戶忽略,當(dāng)小柱經(jīng)過(guò)上樣,淋洗步驟后,乙酸乙酯*被洗掉,洗脫液里面只有甲醇,譜圖上不會(huì)出現(xiàn)乙酸乙酯的峰,所以才會(huì)出現(xiàn)客戶做出來(lái)回收率為零的假結(jié)果。

為了*解決這個(gè)問(wèn)題,安譜新推出了用甲醇做為溶劑的標(biāo)準(zhǔn)品,從源頭上*解決這個(gè)問(wèn)題。

 

CDGG-014445-06

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素)標(biāo)準(zhǔn)品

200ug/mL 于甲醇 1mL

 

八:試驗(yàn)中用到的耗材

 

快,關(guān)注上海安譜,一起漲姿勢(shì)~


 

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