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     目前復雜基質中四環素類化合物的檢測方法主要參照GB/T 23409-2009、GB/T 23409-2009、 GB/T 20764-2006和GB/T 22990-2008。但是國標的方法普遍存在以下的缺陷：

      安譜實驗成功開發出CNW II代四環素檢測SPE柱，與HLB串聯使用，針對各種復雜食品基質（蜂蜜、牛奶、豬肉、豬肝等），實驗過程方便，無需氮吹，回收率高且穩定，雜峰少。

一、樣品前處理

     準確稱量2g樣品（jing確到0.01g），加入四環素標品（上機的加標濃度5ppm），加入20mL Na2 EDTA-Mcllvaine 緩沖溶液，渦旋混合2min后，于35°C超聲20min，然后4000r/min，離心10min，上層溶液過濾至另一個50mL離心管。重復提取一次，上清液過濾后收集，將兩次過濾后的溶液混合，取10mL上清液后離心取上清，待上樣。

二、SPE操作過程

小柱：Poly-sery HLB小柱 (SBEQ-CA3181)

活化：5mL甲醇

平衡：10mL水

上樣：提取液 

淋洗：5mL甲醇-水溶液（5: 95）

洗脫：5mL甲醇，洗脫后，向洗脫液中加氨水，使pH值在8-10之間。

小柱：CNW II代四環素檢測SPE小柱（復雜基質）(SBEQ-CA6980)

活化：5mL甲醇

平衡：5mL 5%氨水甲醇

上樣：HLB小柱的洗脫液 

淋洗：5 mL 甲醇

洗脫：4mL洗脫液（甲醇-乙腈-0.01M草酸（pH 2.00）1.5: 1.5: 7）

從洗脫液中取部分樣品至2mL進樣小瓶，待HPLC-UV檢測

三、色譜條件

色譜柱：Athena C18, 250mm*4.6mm，5µm

流動相：乙腈/甲醇/草酸（0.01M）=1.5:1.5:7，pH=2.0

流速：1.0mL/min

柱溫：30°C

進樣量：10µL

檢測器：紫外（361nm）

四、實驗譜圖

五、實驗數據

結論：HLB+四環素柱在凈化復雜基質時，可以避免HLB+WCX的柱子回收率驟降的現象，保證高回收率，同時可以去除許多雜質。

六、實驗耗材

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