一、保留值與分離度重現性不好原因分析

二、造成色譜峰（ 不對稱）拖尾的原因

1．色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷；

2．柱頭有污染；

3．樣品超載；

4．樣品溶劑不合適；

5．柱外效應；

6．化學或二次保留（硅羥基）效應；

7． 緩沖容量不足或不合適；

8． 重金屬污染。

三、如何解決峰形拖尾的問題

A. 與化學有關的拖尾問題

1．流動相中，加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺；

2．如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；

3.降低進樣量至<1μg。

B. 與色譜柱有關的拖尾問題

1.如柱頭處有強保留的樣品組分積聚，反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇，加1%氫氧化銨混合液沖洗；正向柱可用甲醇沖洗；

2.使用保護柱。

C. 與HPLC系統有關的峰拖尾和峰加寬

1.進樣體積過大，（通常≤25μL）；

2.進樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大（*連接管應<20cm，內徑為0.007"）；

3.檢測器流通池的體積過大。

四、如何貯存色譜柱

1.防止緩沖溶液和水溶液流動相產生微生物,做到流動相用多少配多少, 或在水流動相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細菌生長（一定當心其毒性和潛在的爆炸性）；或在流動相中加20%的有機改性劑，也可抑制微生物生長， 有機改性劑還有助于流動相脫氣。

2.盡可能將色譜柱貯存于100%有機溶劑（乙晴）中，避免在緩沖溶液中保存。

3.使用緩沖溶液后的色譜柱，應用15～20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水-有機溶劑流動相沖洗色譜柱，后換成100%有機溶劑貯存。

4.避免用純水沖洗鍵合致密的C18柱。

5.將色譜柱的兩端用堵頭擰好，以免柱床填料干裂。