諾博萊德 外泌體提取試劑盒（乳液）

外泌體提取試劑盒（乳液）常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5100

產(chǎn)品名稱：外泌體提取試劑盒（乳液）

產(chǎn)品規(guī)格：20T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：外泌體提取試劑盒（乳液）

規(guī)格：20T

儲(chǔ)存條件：室溫保存，有效期2年，使用前請(qǐng)充分混勻。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5100 外泌體提取試劑盒（乳液）

適用于牛奶、羊奶、馬奶、駝奶等  400 500mL 的初始乳液

產(chǎn)品介紹：

外泌體是由細(xì)胞分泌的包含 RNA 和蛋白質(zhì)的小囊泡（30-150nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。外泌體被認(rèn)為具有細(xì)胞間信使的功能，在特定細(xì)胞之間傳遞它們的效應(yīng)物或信號(hào)分子；然而其構(gòu)造、效應(yīng)物組成以及所參與的生物學(xué)通路目前尚不明晰。

外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。外泌體快速提取試劑盒，組分經(jīng)過(guò)優(yōu)化處理，適用于乳液中的外泌體提取，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒，可用于電鏡分析、NTA粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等。

自備材料：

高速離心機(jī)（可達(dá)到 10000g 離心力），渦旋振蕩器；50mL 離心轉(zhuǎn)子，50mL 離心管，2mL 離心轉(zhuǎn)子，1.5mL 離心管，PBS 緩沖液。

操作步驟：

1. 樣品預(yù)處理

(1) 取樣：如果是凍存樣品，從冰箱取出后于 25℃水浴中進(jìn)行解凍，將wan全融化后的樣品置于冰上；如果是新鮮樣品，收集樣品后置于冰上。

(2) 樣品初始用量：?jiǎn)未翁崛r(shí)的乳液優(yōu)良體積為 50mL。

(3) 離心去脂：將樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，于 4℃以 10000g 離心 20min，去除樣品中的脂質(zhì)及部分蛋白（注：離心后樣品分為三層，上層為脂質(zhì)層，下層為蛋白沉淀，中間層為乳清。離心后上層狀態(tài)為“致密、穩(wěn)定、不易脫落"，若上層“松軟、易脫落"且下層沉淀較多，可繼續(xù)重復(fù)此步驟，每次離心取中間層液體）。

(4) 乳清轉(zhuǎn)移：將去除脂質(zhì)的乳清（中間層液體）轉(zhuǎn)移至新的 50mL 離心管中（注：可用槍頭將上層脂質(zhì)戳破后緩慢傾倒，或用移液器轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移后的乳清中帶有少量脂質(zhì)和沉淀是正常現(xiàn)象，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)）。

2. 去除雜蛋白

(1) 乳清澄清：乳清中加入 Solution A，將離心管顛倒混勻至呈現(xiàn)“半透明狀"，再加入 Solution B，顛倒混勻后于 2℃至 8℃靜置 10min（注：靜置完成后輕輕晃動(dòng)離心管，呈現(xiàn)“豆花狀"固體，液體部分為“透明狀"。若未呈現(xiàn)“豆花狀"或樣品仍為“乳白色"，可再適當(dāng)加入 Solution B 至液體為透明狀“透明狀"）。

注：具體加入劑量請(qǐng)根據(jù)上表等比例換算。

(2) 離心去蛋白：將澄清后的乳清于 4℃以 10000g 離心 10min，收集上清液。

(3) 上清液過(guò)濾：將收集的上清液轉(zhuǎn)移至 50mL 離心過(guò)濾柱中，于 4℃以 3000g 離心 2min。（注：若未過(guò)濾wan全，可重復(fù)此步驟。50mL 離心過(guò)濾柱為一次性耗材，不建議重復(fù)使用）。

(4) 將過(guò)濾后的上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中，加入 Solution C 后顛倒混勻（注：Solution C 加入劑量和Solution B 劑量保持一致）。

3. 提取外泌體

(1) 上清液預(yù)處理：在加入 Solution C 后的上清液中加入 Solution D，具體加入劑量如下：

注：其他劑量請(qǐng)根據(jù)上表等比例換。

(2) 溶液混合：加入 Solution D 后將離心管蓋緊，通過(guò)渦旋振蕩器混勻 1min，再放置于 2℃至 8℃靜置至少 2h（注：增加靜置時(shí)間可提高外泌體得率，但靜置時(shí)間不可超過(guò) 24h）。

(3) 沉淀外泌體：取出裝有混合液的離心管于 4℃以 10000g 離心 60min，棄上清，沉淀中富含外泌體顆粒（注：盡可能吸凈上清液）。

(4) 外泌體重懸：取 1×PBS 均勻吹打離心沉淀物（具體加入劑量如下表），待其溶解后，將重懸液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL 離心管中；

注：其他劑量請(qǐng)根據(jù)上表等比例換算。

(5) 收獲外泌體顆粒：將含有重懸液的 1.5mL 離心管于 4℃以 12000g 離心 5min，保留上清液，該上清液中富含外泌體顆粒（注：若沉淀較多，可重復(fù)該步驟多次至無(wú)明顯沉淀，每次取離心上清液。外泌體溶液可能帶有淡淡的乳白色，此為正常現(xiàn)象）。

(6) 外泌體的保存：純化后的外泌體以 50-100μL 進(jìn)行分裝保存于-80℃低溫冰箱中，以備后繼實(shí)驗(yàn)使用。

注意事項(xiàng)：本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

外泌體提取試劑盒（乳液）常備現(xiàn)貨

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