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Hot Start Taq DNA Polymerase 核酸檢測
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/200T |
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貨號 | T0098 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
諾博萊德 TaqMan One Step RT-qPCR Kit
Taqman一步法熒光定量PCR試劑盒 核酸檢測
產品貨號:T0098
產品名稱:TaqMan One Step RT-qPCR Kit
產品別名:Taqman一步法熒光定量PCR試劑盒,一步法實時熒光定量試劑盒
產品規格:50T/200T
產品簡介:
儲存條件:Store at -20℃,1 year.
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
NobleRyderT0098 TaqMan One Step RT-qPCR Kit本產品是采用探針法(TaqMan,Molecular Beacon等)進行一步法Real-Time RTqPCR的專用試劑盒。使用本產品進行RealTime RT-qPCR反應時,逆轉錄和定量PCR在同一反應體系中進行,反應過程中無需添加試劑,無需打開管蓋,避免了污染的同時提高了實驗效率。本產品的檢測靈敏度高,熒光信號強,信噪比高,非常適合于RNA病毒等微量RNA的檢測。其所包含的特殊緩沖系統能使逆轉錄酶與DNA聚合酶同時發揮最大功效,提高反應效率。使用本產品可以得到更寬廣的線性范圍,對目的基因定量更準確,重復性好,可信度高。
試劑原理:
TaqMan One Step RT-qPCR kit 首先利用反轉錄酶RTase將RNA反轉錄成cDNA,再以cDNA為模板 通過熱啟動DNA擴增酶在單管閉管反應體系中連續進行PCR擴增反應,利用熒光標記探針(Probe) 水解發光,并對發光信號進行檢測。
1. RT-PCR
首先采用反轉錄酶以RNA為模板合成 cDNA,然后再以合成的cDNA為模板,經過PCR擴增反應的 熱變性、引物退火、鏈延伸三個步驟循環往復,在短時間內擴增得到大量DNA片段。
2. 熒光檢出
TaqMan 探針法是使用 5’端帶有熒光物質,3’端帶有淬滅物質的 TaqMan 探針進行熒光檢測的方法。 在探針沒有被 Taq 酶分解時,5’端的熒光物質受到 3’端淬滅物質的制約,不能發出熒光。而當 TaqMan 探針被分解后,5’端的熒光物質便會游離出來,發出熒光。在 PCR 反應液中加入熒光探針后的退火 過程中,熒光探針便會和模板配對區域結合。在 PCR 反應的延伸過程中,TaqDNA聚合酶的 5’→3’ 核酸外切酶活性可以分解和模板雜交的熒光探針,游離出的熒光物質便會發出熒光。通過檢測反應 體系中的熒光強度,可以達到檢測 PCR 產物擴增量的目的。
RT-PCR 反應體系配制
1. 通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結果。反應性能較差時,可以在0.1~1.0μM范圍內調整引物濃度;
2. 通常探針濃度可在0.1~0.3μM范圍內優化。可進行濃度梯度的實驗,尋找引物和探針的優良組合。探針的使用與RealTimePCR擴增儀、探針種類、熒光標記物質種類有關,請參照儀器說明書或各熒光探針的具體使用要求進行;
3. 不同種類的模板中含有的靶基因的拷貝數不同,必要時可進行梯度稀釋,確定優良的模板添加量。
質量控制:
1. 功能檢測:qPCR的敏感性、特異性、可重復性;
2. 無外源核酸酶活性,無外源內切、外切核酸酶污染。
技術說明:
1. 該體系常用50℃進行反轉錄反應,可以在45℃~60℃范圍內進行反轉錄溫度優化;根據反應特征不同,可以在5~30分鐘內對反轉錄時間進行優化;
2. 該體系所用的反轉錄酶是在MMLV基礎上進行了基因改造,去除了RNaseH活性,使其具有更高的溫度耐受性和反轉錄溫度,對RNA復雜結構模板具有更高的反轉錄效率;
3. 該體系具有更好的體系穩定性和適用性,非常適合于病毒類、組織提取RNA復雜模板的檢測;對極限濃度模板的擴增效果更加穩定。
Taqman一步法熒光定量PCR試劑盒 核酸檢測
產品訂購信息
T0098 TaqMan One Step RT-qPCR Kit 50T/200T
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