NobleRyderD9908  革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit

革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 質粒提取

產品貨號：D9908

產品名稱：革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit

英文名稱：Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit

產品規格：50T/100T

產品簡介：

儲存條件：酶附件-20℃，其它試劑RT，復檢期1年

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyderD9908  革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit產品內容

注意：使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入），混勻，置于 2-8℃保存。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

操作步驟（僅供參考）：  

1. 取1-5 mL 細菌培養物，12000 rpm離心1 min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。  

2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入200 μL溶液Ⅰ(請先檢查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋渦振蕩器che底懸浮細菌細胞沉淀。再向其中加入50μL溶jun酶，混勻，37℃水浴30 min以上（根據菌液量可適當加長水浴時間）。注意：如果菌塊未che底混勻，會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。如不能確定為何種菌，請按陽性菌處理。  

3. 向離心管中加入250 μL溶液Ⅱ，溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和，以免污染基因組DNA，此時菌液應變得清亮粘稠，作用時間不要超過5 min，以免質粒受到破壞。  

4. 向離心管中加入350 μL溶液Ⅲ，立即溫和地上下翻轉6-8次，充分混勻，此時會出現白色絮狀沉淀，12000 rpm離心10 min 。注意：溶液Ⅲ加入后應立即混勻，避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。

5. 取上一步上清，加入0.4倍體積無水乙醇，充分混勻。（體積過多可分兩次混合，然后上柱）。

6. 將上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中），室溫放置2 min，12000 rpm 離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中( 如果一次加不完，可分兩次吸附) 。  

7. 向吸附柱中加入600μL漂洗液Ⅰ(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8. 向吸附柱中加入 700μL 漂洗液Ⅱ(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm 離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

9. 向吸附柱中加入500μL漂洗液Ⅱ，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

10. 12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR等。

11. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200μL經65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置2min，12000rpm離心1min。

12. (可選)為了增加質粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心1min。

注意事項：  

1. 使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現混濁，如有混濁現象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復澄清后再使用。  

2. 洗脫緩沖液體積不應少于50 μL，體積過小影響回收效率；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右( 可用NaOH將水的pH值調至此范圍) ，pH 值低于7.0會降低洗脫效率。DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。  

3. 如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10 kb的大質粒，應加大菌體使用量，使用5-10 mL過夜培養物，同時按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脫時可以適當的延長時間，以增加提取效率。  

4. DNA 濃度及純度檢測：得到的質粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。得到的 DNA 可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當于大約50 μg/ mL雙鏈DNA、40 μg/ mL單鏈DNA。OD260/OD280比值應為 1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。

革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 質粒提取

產品訂購信息

D9908  革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit  50T
D1118  革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit  100T