諾博萊德 微量/超微量樣品總RNA快速提取試劑盒

超微量總 RNA 快速提取試劑盒（帶 DNase I）FlashPure Total RNA micro Kit(With DNase I)

目錄號：91516

產品內容

自備試劑

無水乙醇

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

FlashPure Total RNA micro Kit是超微量總RNA提取的專用試劑盒，處理范圍一般為細胞（1~106）或者組織（< 5mg）。

適用于從超微量的細胞、組織、昆蟲、植物、細菌等樣品中提取總 RNA。配有DNase I，在RNA吸附膜上消化gDNA，得到的RNA，無gDNA殘留，可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉錄組測序、RACE等。

產品特點

1. 特殊微量 10 μg 離心柱設計，可以最di 6μl 洗脫，可提高 RNA 的濃度。

2. 特殊無墊圈離心柱設計，確保離心后無液體殘留和污染，保證 RNA純度。

3. 獨you的糖酚去除劑 PAD 可以清除植物多糖多酚或者昆蟲的糖原，幾丁質多糖等雜質，提高富含雜質的昆蟲和植物 RNA 的提取質量。

4. 無毒：免氯仿、免β-巰基乙醇！

5. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

6. 高效：提取全過程僅需 30 min！

注意事項：

1. 所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進行。

2. 部分含多糖多酚、幾丁質多糖或者次級代謝產物豐富的昆蟲樣品，或者植物樣品，提取效果不佳（如降解）可以嘗試在裂解液 PRL 中添加糖酚去除劑 PAD 后提取。具體添加比例為 10 體積（1ml）PRL：1 體積（100μl）糖酚去除劑 PAD。

3. 不是多糖多酚的材料不用加糖酚去除劑 PAD。

操作步驟

第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶身的標簽。

提示：

(一) 樣品裂解勻漿：

a．組織（動物、植物、昆蟲）：≤5 mg 組織加入 300 μl 裂解液 PRL，勻漿至無明顯組織塊。

b．貼壁細胞：無需消化，完quan吸棄培養基后，直接在培養板/皿中加入裂解液 PRL 裂解細胞，并用移液槍反復吹打，幫助裂解。

（≤10⁵ 細胞加 100μl 裂解液 PRL，≤10⁶ 細胞加 300μl 裂解液 PRL）。

c．懸浮細胞：離心沉淀細胞(≤500 x g)，完quan去除上清后用裂解液PRL 重懸細胞沉淀。可短暫渦旋振蕩。

d．其它組織：其他難裂解的組織，細菌，酵母，植物勻漿需配合高速珠磨均質儀器和適合裂解珠（玻璃珠，鋼珠，鋯珠等）。

(二) 樣品清理：

此步驟為可選步驟，主要是針對動植物組織和細胞，若研磨勻漿后不溶物碎片太多，可將裂解物 12,000 rpm 離心 1 min，沉淀裂解困難的碎片或者不溶物，將上清液轉移至新的 1.5ml 離心管中。對于樣品量很低（細胞數≤105）)或勻漿后能充分裂解的樣品無需此步驟。

(三) 樣品純化：

1. 向裂解物或上清中加入等體積的無水乙醇到上一步的中吹打混勻。

2. 將上一步的混合液加入超微量 RNA 吸附柱（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。此時，RNA 被吸附在膜上。

3. 加入 350 μl 去蛋白液 RW1，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

4. DNase I 工作液配制：取 20 μl DNase Buffer 和 2 μl DNase I 至新的RNase-Free 離心管中，輕輕吹打混勻。（處理多個樣品，按照比例放大）

5. 向 RNA 吸附膜中央加入 22 μl 的 DNase I 工作液，室溫放置 15 min。

6. 加入 350μl 去蛋白液 RW1，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

7. 加入 500μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

8. 重復步驟 7 一次。

9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的乙醇。

10. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央部位懸空滴加 30-50μl RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

11. 提取的總 RNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。

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附錄：

一、液氮研磨（自動研磨儀）—— 適用于各種樣本

a. 把研磨模塊也丟到液氮中預冷，直到沒有氣泡冒出視為預冷完畢。

b. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3 mm 鋼珠 3 粒，放進≤50 mg 樣本，投入液氮中預冷。

c. 把預冷好的離心管插入研磨模塊中，放進研磨儀，設置 55 個頻率， 震蕩 30~60 sec。（以北京赫得京 N9548 為例）

d. 研磨完成后，馬上加 550 μl 裂解液 RLA，劇烈渦旋 30 sec，混勻。

e. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

二、免液氮直接研磨（自動研磨儀）—— 適用于新鮮樣本

a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中加入 5 mm 鋼珠 1 粒，加 1 ml 裂解液 RLA，放進≤100 mg 樣本，設置 60 個頻率，震蕩 2 min。

b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

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