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北京諾博萊德科技有限公司
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當前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>生化試劑>>氮代謝系列>> BG6005谷an酰胺酶活性測定試劑盒 氮代謝

谷an酰胺酶活性測定試劑盒 氮代謝

參  考  價面議
具體成交價以合同協議為準

產品型號BG6005

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質生產商

所  在  地北京市

更新時間:2025-03-31 17:37:58瀏覽次數:66次

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供貨周期 現貨 規格 50T/48S
貨號 BG6005 應用領域 環保,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 在氮素代謝中具有重要調控作用,尤其是調節游離氨含量和尿素代謝
GLS(EC 3.5.1.1)是酰胺基水解酶,催化天dong酰胺水解成谷an酸氨,在氮素代謝中具有重要調控作用,尤其是調節游離氨含量和尿素代謝。
谷an酰胺酶活性測定試劑盒 氮代謝

谷an酰胺酶(glutaminase, GLS) 活性測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48

谷an酰胺酶活性測定試劑盒 氮代謝

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

GLS(EC 3.5.1.1)是酰胺基水解酶,催化天dong酰胺水解成谷an酸氨,在氮素代謝中具有重要調控作用,尤其是調節游離氨含量和尿素代謝。

測定原理:

GLS 催化谷an酰胺水解成 L-谷an酸氨,利用奈氏試劑檢測氨增加的速率,即可計算其酶活性。

組成:

產品名稱

BG6005-50T/48S

Storage

試劑一:液體

60 ml

4℃

試劑二:液體

20 ml

4℃

試劑三:液體

30 ml

常溫

試劑四:液體

10 ml

常溫

試劑五:液體

6 ml

常溫

試劑六:液體

6 ml

常溫避光

說明書

一份

自備儀器和用品:

臺式離心機、可見分光光度計、水浴鍋、1ml 玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取:

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量

(104 個):試劑一體積(ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

8000g4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質量(g):試劑一體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g組織,加入 1ml 試劑一),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

1、分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 420nm,蒸餾水調零。

2、樣品測定(在 EP 中加入下列試劑):

試劑名稱(μl)

測定管

對照管

樣本

25


蒸餾水


25

試劑一

100

100

試劑二

400

400

混勻,37℃水浴 1 小時

試劑三

525

525

混勻,8000 g,25℃離心 10 min;取上清液,在EP 管中加入下列試劑

上清液

650

650

試劑四

150

150

試劑五

100

100

試劑六

100

100

混勻,室溫靜置 15min,420nm 處讀取吸光值A,計算ΔA=A 測定管-A 對照管。對照管只要做一管。

注意:

1、試劑六如出現沉淀,靜置后取上清使用。

2、ΔA(A 測定管-A 對照管)若出現負值,可能是酶活性較低,可將反應時間 1h 延長到 2h,相應的在計算公式中除以 2。

酶活性計算:

標準條件下測定的回歸方程為y =3.8488x +0.0057,R2 = 0.9983;x 為標準品濃度(μmol/ml),y 為吸光值A。

1、血清(漿)GLS 活性

單位定義:每ml 血清(漿)每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定義為一個酶活力單位。GLS(nmol /min/ml)= (ΔA-0.0057) ÷3.8488×V 反總÷V 樣÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)

2、組織、細菌或細胞 GLS 活性

按樣本蛋白濃度計算:

單位定義:每mg 蛋白質每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定義為一個酶活力單位。

GLS(nmol /min /mg prot)= (ΔA-0.0057) ÷3.8488×V 反總÷(V 樣×Cpr)÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)÷Cpr

按樣本鮮重計算:

單位定義:每g 組織每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定義為一個酶活力單位。

GLS(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0057)÷3.8488×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T×1000

=181.8×(ΔA -0.0057)÷W

按細菌或細胞密度計算

單位定義:每 1 萬個細菌或細胞每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定義為一個酶活力單位。GLS

(nmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0057) ÷3.8488×V 反總÷(500× V 樣÷V 樣總)÷T×1000

=0.3637×(ΔA-0.0057)

V 樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應時間,60min;V 反總:反應體系總體積,1.05ml;V 樣:加入反應體系中樣本體積,0.025ml;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/ml;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數, 500 萬; 1000,μmol 到nmol 換算系數。


谷an酰胺酶活性測定試劑盒 氮代謝

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