諾博萊德 核蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）

NobleRyder P5086 核蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）

產品貨號：P5086

產品名稱：核蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）

產品規格：50T/100T

核蛋白提取試劑盒-蛋白組實驗、質譜適用

產品簡介：

中文名稱：核蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）

規格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder P5086 核蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）

核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動物細胞和各種動物實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等動物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的獨te配方能夠有效溶解細胞核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質譜實驗的組份，最后得到的蛋白質樣品經過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質組學相關實驗研究。本產品的蛋白酶抑制劑混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF導致的質譜峰漂移，因此使用本產品提取的蛋白樣品可以用于質譜(MassSpectrometry,MS)檢測和分析，蛋白質組學(proteomics)等相關研究。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

適用樣本：動物細胞/組織

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產品簡介：

核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動物細胞和各種動物實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等動物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的獨te配方能夠有效溶解細胞核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含SDS、Triton X100、chaps等可能影響質譜實驗的組份，最后得到的蛋白質樣品經過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質組學相關實驗研究。

本產品的蛋白酶抑制劑混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF導致的質譜峰漂移，因此使用本產品提取的蛋白樣品可以用于質譜(Mass Spectrometry,MS)檢測和分析，蛋白質組學(proteomics)等相關研究。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的蛋白也可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shi凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產品特點：

1、使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

2、將蛋白提取的時間縮短至 30 分鐘-1 小時。

3、含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

4、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5、蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。

6、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含 5 種獨立的蛋白酶抑制劑 Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括si氨酸蛋白酶、半guang氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

使用注意事項：

1. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋

時試劑損失。

2. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

5. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

6. Western實驗內參可以選用Lamin B、TBP、Histon H3。

操作步驟

1.提取液制備：

將試劑B1和試劑B2混合，配成蛋白提取液B，充分混勻備用。

每500μl蛋白提取液B中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】:

1)蛋白提取液B短期置4℃保存，長期不用的可以分裝后-20℃保存，避免反復凍融。

2)根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制劑可以一次加入。

3)加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

4)以下步驟中使用的蛋白提取液B為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取5×10⁶-1×10⁷個細胞（大約50 mg細胞/50μl細胞），在4℃，500×g條件下離心5分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。

【注】

1) 組織樣本用jian刀剪碎，加冷PBS，用組織勻漿器/機勻漿至無明顯肉眼可見固體。勻漿液在4℃，1000×g力條件下離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。

3.用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4.大約每20μl細胞（離心后細胞沉淀體積）中加入200-300μl冷的提取液A，高速渦旋振蕩混勻或吹打混勻，置2-8℃條件振蕩10-30分鐘。

【注】:

1)提取液A處理后細胞體積應減少，否則延長提取液A振蕩處理時間。

2)使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

3)沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

5.然后在4℃，2000×g條件下離心10分鐘。棄上清，收集沉淀。

6.在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B，高速渦旋振蕩15秒。

【注】:

1)加提取液B前，必須盡可能吸干提取液A。否則會影響核蛋白純度。

2)也可以用PBS將沉淀洗滌一次。PBS重懸沉淀，2000×g離心15分鐘。

3)提取液B用量根據實驗細胞數量情況調整，細胞數量多則多加。也可根據預實驗時最終蛋白濃度實際情況調整。

7. 置2-8℃條件振蕩30-40分鐘。

【注】:

1)使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

2)沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

3)此步驟蛋白提取液處理產物中有時會出現少量透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的蛋白復合物。不檢測和基因組DNA結合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續實驗即可；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300 w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續實驗。檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，不必進行超聲處理。如果引入其他外源性蛋白質不影響下游實驗的話，也可以加入DNase處理。

8.在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。

9.將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

10.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

【注】:

1)建議用BCA法進行蛋白定量。

2)蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

11. 將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于下游實驗。

【注】:

1)蛋白樣品中含有鹽，需要脫鹽處理后用于雙向電泳。

2)經透析或脫鹽處理的蛋白樣品不含有去垢劑和高濃度鹽。

核蛋白提取試劑盒-蛋白組實驗、質譜適用

產品訂購信息：

P5086  核蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）  50T/100T