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北京諾博萊德科技有限公司
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當前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>分子生物學>>質粒提取>> D9928去內毒素質粒小量提取試劑盒-常備現貨

去內毒素質粒小量提取試劑盒-常備現貨

參  考  價面議
具體成交價以合同協議為準

產品型號D9928

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質生產商

所  在  地北京市

更新時間:2025-03-15 09:31:53瀏覽次數:188次

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供貨周期 現貨 規格 50T / 100T
貨號 D9928 應用領域 環保,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 可直接用于細胞轉染等要求較高的實驗
本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,根據離心吸附柱在高鹽狀態下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。
去內毒素質粒小量提取試劑盒-常備現貨

去內毒素質粒小量提取試劑盒


NobleRyderD9928  去內毒素質粒小量提取試劑盒 Free Endotoxin Plasmid Extraction Mini Kit

產品貨號:D9928

產品名稱:去內毒素質粒小量提取試劑盒 Free Endotoxin Plasmid Extraction Mini Kit

英文名稱:Free Endotoxin Plasmid Extraction Mini Kit

產品規格:50T/100T

去內毒素質粒小量提取試劑盒-常備現貨

產品簡介:

儲存條件:酶附件-20℃,內毒素清除劑4℃,其它試劑RT,復檢期1年

NobleRyderD9928  去內毒素質粒小量提取試劑盒本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,根據離心吸附柱在高鹽狀態下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。 NobleRyder公司研制的內毒素清除劑,可最大限度地除去內毒素。從1-5ml大腸桿菌LB培養液中,可快速提取5-15μg高純度質粒DNA,提取率達85-90%。使用本試劑盒提取的質粒DNA純度高,可直接用于細胞轉染等要求較高的實驗,以及其他各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等試驗。

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標簽(每瓶需單獨加入45mL 無水乙醇)。P1在使用前先加入RNase A(將試劑盒中提供的RNase A全部加入),混勻,置于2-8℃保存。如非指明,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

第一次開蓋使用后,請將內毒素清除試劑于2-8℃保存,可以縮短使用時的冰上預冷時間。


具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準


操作步驟(僅供參考):

1. 取 1-5mL 細菌培養物,12000rpm 離心 1min,盡量吸除上清(菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中)。

2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入200μL P1(請先檢查是否已加入RNase A),使用移液器或旋渦振蕩器che底懸浮細菌細胞沉淀。注意:如菌塊未che底混勻,會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。

3. 向離心管中加入200μL P2,溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解。注意:混勻一定要溫和,以免污染細菌基因組 DNA,此時菌液應變得清亮粘稠,作用時間不要超過 5min,以免質粒被破壞。

4. 向離心管中加入200μL P3,立即溫和地上下翻轉6-8次,充分混勻,此時會出現白色絮狀沉淀。12000rpm離心10min,用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中,盡量不要吸出沉淀。注意:P3加入后應立即混合,避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。

5. 加入上清1/5體積的冰上預冷內毒素清除劑,振蕩混勻溶液變渾濁,冰浴5-10min至溶液變清亮。

6. 42℃水浴 5min,不時振蕩,溶液又變渾濁,12000rpm室溫離心5min,溶液應分為兩相,上層水相含質粒DNA,下層油相含內毒素。

7. 將含質粒DNA的上層水相轉移至新管,棄下層油相,注意不要吸入油狀相。重復抽提三次,即重復步驟5-7三次。

8. 加入0.4倍上清體積的無水乙醇,充分混勻后加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中),室溫放置2min,12000rpm 離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

9. 向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

10. 向吸附柱中加入600μL漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

11. 12000rpm 離心 2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗,如酶切、PCR等。

12. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200μL經65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置2min,12000rpm離心1min。

13. 為了增加質粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置 2min,12000rpm 離心1min。

注意事項:

1. 使用前請先檢查P2和P3是否出現混濁,如有混濁現象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復澄清后再使用。P2、P3、漂洗液使用后應立即擰緊蓋子。

2. 洗脫緩沖液體積不應少于50μL,體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍),pH 值低于7.0會降低洗脫效率,DNA產物應保存在-20℃,以防DNA降解。

3. 如果所提質粒為低拷貝質?;虼笥?0kb的大質粒,應加大菌體使用量,使用5-10mL過夜培養物,同時按照比例增加P1、P2和P3的用量,吸附和洗脫時可以適當的延長時間,以增加提取效率。

4. DNA 濃度及純度檢測:得到的質粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。得到的 DNA 可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當于大約50ug/mL雙鏈DNA、40ug/mL單鏈DNA。OD260/OD280比值應為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響吸光值,但并不表示純度低。

去內毒素質粒小量提取試劑盒-常備現貨

產品訂購信息

D9928  去內毒素質粒小量提取試劑盒 Free Endotoxin Plasmid Extraction Mini Kit  50T/100T

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