諾博萊德 胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒

NobleRyder P4957 胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒

產品貨號：P4957

產品名稱：胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒

產品規格：50T/100T

胞漿蛋白核蛋白組蛋白提取試劑盒

產品簡介：

中文名稱：胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒

規格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代培養動物細胞和各種動物實體組織樣品中提取胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白。本試劑盒含有的獨te配方能夠有效溶解細胞膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于esternBlotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白，下游應用范圍廣，提取液裂解細胞的能力較溫和，需要根據實際樣本情況優化裂解時間。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

適用樣本：動物細胞/組織

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產品簡介：

胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代培養動物細胞和各種動物實體組織樣品中提取胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白。本試劑盒含有的獨te配方能夠有效溶解細胞膜組份。

本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白，下游應用范圍廣，提取液裂解細胞的能力較溫和，需要根據實際樣本情況優化裂解時間。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產品特點：

1、使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

2、提取過程簡單方便。

3、含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

4、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5、蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。

6、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括si氨酸蛋白酶、半guang氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

二、細胞蛋白提取

1. 提取液制備：

每 200μl 蛋白提取液 A 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每 200μl 蛋白提取液 B 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取5-10×10⁶個細胞，在4℃，1000×g 條件下離心5分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。

3. 用冷 PBS 洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 每 5-10×106個細胞中加入 400μl 冷的提取液 A，高速渦旋振蕩 15 秒或吹打混勻，置 2- 8℃條件振蕩 20-30 分鐘。

5. 然后在 4℃，5000×g 條件下離心 10 分鐘。

6. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請置于冰上或-80℃冰箱保存備用。

7. 沉淀用 200μl PBS 洗滌一次，在 4℃，5000×g 條件下離心 5 分鐘，棄上清。

8. 在沉淀中加入 100μl 冷的提取液 B，高速渦旋振蕩 5 秒。

9. 置 2-8℃條件振蕩 20 分鐘。

10. 在 4℃，16000×g 條件下離心 15 分鐘。

11. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。留沉淀用于下步的組蛋白/染色質相關蛋白提取。

12. 在沉淀中加入 100μl 組蛋白提取液 C，充分混勻。

13. 用 200μl 槍頭反復吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻，置 4℃冰箱過夜存放。

14. 在 12000×g 條件下離心 10 分鐘，收集上清。

15. 在上清中加入 10-20μl 試劑 D 充分混勻，即得到組蛋白。

16. 在組蛋白樣品中加入上樣緩沖液混勻后煮沸，分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

三、組織蛋白提取

1. 提取液制備：

每 200μl 蛋白提取液 A 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每 200μl 蛋白提取液 B 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取適量組織樣本，用手術jian刀盡可能剪碎，加冷 PBS，用組織勻漿機/勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體，冰上靜置 5 分鐘，小心將上清吸入另一預冷的干凈離心管。

3. 在 4℃，500×g 條件下離心 5 分鐘，棄上清。

4. 每 20-30μl 細胞沉淀體積（20mg 組織）中加入 200μl 冷的提取液 A，高速渦旋振蕩 15 秒或吹打混勻，置 2-8℃條件振蕩 20-30 分鐘。

5. 然后在 4℃，5000×g 條件下離心 10 分鐘。

6. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請置于冰上或-80℃冰箱保存備用。

7. 沉淀用 PBS 洗滌一次，在 4℃，5000×g 條件下離心 5 分鐘，棄上清。

8. 在沉淀中加入 100-200μl 冷的提取液 B，高速渦旋振蕩 5 秒。

9. 置 2-8℃條件振蕩 30 分鐘。

10. 在 4℃，16000×g 條件下離心 10-15 分鐘。

11. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。留沉淀用于下步的組蛋白/染色質相關蛋白提取。

12. 在沉淀中加入 100μl 組蛋白提取液 C，充分混勻。

13. 用 200μl 槍頭反復吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻，置 4℃冰箱過夜存放。

14. 在 12000×g 條件下離心 10 分鐘，收集上清。

15. 在上清中加入 10-20μl 試劑 D 充分混勻，即得到組蛋白。

16. 在組蛋白樣品中加入上樣緩沖液混勻后煮沸，分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹di清除殘留清潔劑。

3. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗。

胞漿蛋白核蛋白組蛋白提取試劑盒

產品訂購信息：

P4957  胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒  50T/100T