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技術(shù)手冊(cè) - 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR

閱讀:37      發(fā)布時(shí)間:2025-04-23
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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),又稱(chēng)為PCR,是分子生物學(xué)技術(shù)之一。20世紀(jì)70年代,研究人員報(bào)道了使用合成引物和DNA聚合酶從模板復(fù)制單鏈DNA。然而,直到1983年,Kary Mullis才發(fā)明出用于擴(kuò)增目標(biāo)DNA的研究工具,就是我們今天所熟知的PCR方法。從此以后,PCR成為分子生物學(xué)研究不可少的一部分,被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、疾病診斷、農(nóng)業(yè)檢測(cè)和法醫(yī)鑒定等領(lǐng)域。而Kary Mullis也因這一發(fā)明獲得了1993年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。

PCR是一種能夠在短時(shí)間內(nèi)將單個(gè)DNA分子擴(kuò)增數(shù)百萬(wàn)倍的生化過(guò)程。其擴(kuò)增過(guò)程包括三個(gè)連續(xù)步驟:(1)變性(Denaturation),對(duì)雙鏈DNA模板進(jìn)行高溫加熱,使其解離;(2)退火(Annealing),被稱(chēng)為引物的短DNA分子與目標(biāo)DNA的側(cè)翼區(qū)域結(jié)合;(3)延伸(Extension),DNA聚合酶沿著模板鏈將引物3'端進(jìn)行延伸。將這些步驟重復(fù)25-35次,即可按指數(shù)方式獲得大量的目標(biāo)DNA拷貝(圖1.1)。

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