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準(zhǔn)備BEGMkit培養(yǎng)基（Lonza/Clonetics，CC-3170）備注：培養(yǎng)基包含（A+B），ATCC不使用BEGM試劑盒提供的GA（慶大霉素-兩性霉素B混合物）和腎上腺素（Epinephrine），另向其中添加額外的5ng/mLEGF、70ng/mL磷酸乙醇胺和10%FBS。可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求添加P/S雙抗，1%。

A：BEBM基礎(chǔ)培養(yǎng)基（貨號CC-3171）500ML

B:細(xì)胞生長添加劑（貨號CC-4175）一套（包含下列試劑）

●BPE,2.0ml●Hydrocortisone,0.5ml●hEGF,0.5ml

●Epinephrine,0.5ml●Insulin,0.5ml●Transferrin,0.5ml

●Triiodothyronine,0.5ml●RetinoicAcid,0.5ml●GA,0.5ml

注意：Theflasksusedshouldbeprecoatedwithamixtureof0.01mg/mLfibronectin,0.03mg/mLbovinecollagentypeIand0.01mg/mLbovineserumalbumindissolvedinBEBMmedium.1）收貨前根據(jù)說明書培養(yǎng)條件，提前準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)所需材料。
2）收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
3）收貨后沒有外觀損壞的情況下用75%酒精消毒后將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h等待細(xì)胞穩(wěn)定。
4）細(xì)胞穩(wěn)定后在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，判斷細(xì)胞的密度并清晰拍照200倍400倍照片最少2張記錄反饋細(xì)胞狀態(tài)以防出現(xiàn)售后作為證據(jù)，沒有照片和反饋默認(rèn)接受細(xì)胞質(zhì)量沒有問題。

備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)密度達(dá)到80%左右，?傳代比例前幾次都按照1:2傳代，傳代后一個(gè)倍增周期后可以長成2瓶80%左右密度的細(xì)胞時(shí)，凍存其中一瓶成1個(gè)1ml的凍存管當(dāng)種子細(xì)胞保存，另外一份長滿的細(xì)胞繼續(xù)1:2傳代，反復(fù)操作后凍存細(xì)胞種子大約3個(gè)以上。后續(xù)根據(jù)細(xì)胞倍增效率和密度可以適當(dāng)擴(kuò)大傳代比例做實(shí)驗(yàn)。

傳代比例：
1個(gè)T25瓶傳2個(gè)6cm的培養(yǎng)皿或者2個(gè)T25瓶相當(dāng)于1:2
1個(gè)T25瓶傳1個(gè)10cm的培養(yǎng)皿或者1個(gè)T75瓶相當(dāng)于1:3