BCA 法蛋白含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。測(cè)定意義：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
測(cè)定原理：
堿性條件下，蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將 Cu2+還原成Cu+；2 分子的BCA 與Cu+結(jié)合，生成紫色絡(luò)合物，在 540-595nm 有吸收峰，562nm 處吸收峰zui強(qiáng)。
自備儀器和用品：
臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)、移液器、1 ml 玻璃比色皿和蒸餾水
組成：
產(chǎn)品名稱 | DE6003-50T/48S | Storage |
試劑A：液體 | 60ml | 4℃ |
試劑B：液體 | 1.2ml | 4℃ |
標(biāo)準(zhǔn)蛋白：液體 | 2ml | 4℃ |
說(shuō)明書 | 一份 |
工作液配制：臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×1 ml），將試劑A 和B 按照 50：1 的比例混合，蓋緊后充分混勻。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：
1、液體樣品：澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。。
2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水）冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即待測(cè)液。
3 、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）： 細(xì)菌、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 562 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 工作液置于 60℃水浴預(yù)熱 30 min。
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 |
蒸餾水（μl） | 20 |
|
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標(biāo)準(zhǔn)品（μl） |
| 20 |
|
待測(cè)液（μl） |
|
| 20 |
工作液（μl） | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻后置于 60℃保溫 30min，于 1ml 比色皿在 562nm 處測(cè)定吸光值A，分別記為A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 測(cè)定。 |
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。計(jì)算公式：
Cpr (mg/ml) = C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）
= 0.5×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）
Cpr (mg/g)= C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷ W
= 0.5×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷ W W: 樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
BCA 法蛋白含量測(cè)定試劑盒，適用于測(cè)定蛋白濃度在 20-5000μg/ml 樣品。測(cè)定前取 1-2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，若A 測(cè)定管－A 空白管﹥1.5，需將樣本用提取液稀釋后再測(cè)定，以確保測(cè)定的準(zhǔn)確性。
