目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>試劑盒>>檢測試劑盒>> TE0157乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒(LD-P比色法)
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | TE0157 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,制藥/生物制藥,綜合 |
乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH或LD)屬于氧化還原酶，能夠催化氫氧原子或電子從一中底物轉移到另一種底物上乳
酸脫氫酶是糖酵解和糖異生的一個極其重要的酶，含有鋅離子，廣泛分布于人和動物組織、植物和微生物中，能可逆的催化乳
酸(L)和丙酮S(P)之間的氧化還原反應。其反應公式：乳酸+NAD+→丙酮s+NADH+H+。其中：L→P為正向反應；
P→L為逆向反應。
乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒(LD-P比色法)是利用乳酸脫氫酶催化上述正反應，即L-乳酸+NAD+→丙酮S+NADH+H+
，在上述反應過程中乳酸氧化成丙酮S，同時NAD+氧化成NADH，引起340nm處吸光度的升高，其升高速率與樣品中LDH活性
呈正比關系，通過分光光度計或自動分析儀檢測340nm處吸光度升高速率，通過計算獲得乳酸脫氫酶的活性。該LD-L法的優點
是：1、乳酸鹽和NAD+底物溶液的穩定性比LD-P法中的
和NADH底物溶液好；2、線性速率反應時間范圍較寬；3、重復性比LD-P法和二硝基苯肼法好；4、準確性比二硝基苯肼法好；
5、適用于自動分析儀。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
自備材料：
1、蒸餾水
2、離心管
3、水浴鍋或恒溫箱
4、96 孔板、酶標儀
操作步驟(僅供參考)：
1、準備樣品：
①血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規方法制備，可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃
保存 1 個月有效，用于 ALT/GPT 的檢測。
②細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織進行勻漿，低速離心取上清，-20℃保存 1 個月有效，
用于 ALT/GPT 的檢測。
③(選做)樣品準備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續計算單
位蛋白重量組織或細胞內的 ALT/GPT 含量。
2、 制作 ALT 標準曲線：取丙酮S標準 1 支，準確加入標準稀釋液 1ml，充分混勻，
即配制成丙酮標準(100mmol/L)，4℃保存備用。臨用前，按丙酮標準(100mmol/L)：丙
酮S標準稀釋液=1：49 的比例混合，即為丙酮標準工作液-丙酮標準(2mmol/L)，以 96
孔板，按下表制備標準曲線，最好設定平行檢測孔，求平均值。
混勻，向各管中加入苯肼顯色液 20ul，混勻，37℃孵育 20min，加入 ALT 顯色基液 200ul，
混勻。室溫放置 5min，以蒸餾水調零，酶標儀 505nm 處讀取各管吸光度。各管吸光度均減
去"0"號管吸光度，所得吸光度差值(縱坐標)與對應的卡門酶活力單位(橫坐標)作圖。注意：
標準品用分光光度計檢測參考值在 0.3~0.9 之間，加入 ALT 顯色基液后其顏色依次為黃色至
棕紅色，應及時檢測，隨著時間的延長其顏色會加深，由于檢測儀器、操作手法等條件的不
同，參考值范圍會有波動。
3、 ALT 加樣：按照下表設置對照孔、測定孔，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生
氣泡。如果樣品中的 ALT 酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。
4、 ALT 測定：混勻，室溫放置 5min，以蒸餾水調零，酶標儀 505nm 處測定對照管、測定
管的吸光度(即為 A 對照、A 測定)，如無 505nm 可選擇 500~520nm。
計算：以系列標準孔活力卡門單位為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，以
(A 測定－A 對照)之差值，從標準曲線查得 ALT 活力卡門單位
參考范圍：成年健康人血清 ALT：5~25 卡門單位/ml
注意事項：
1、苯肼顯色液溶解以后，如果仍然有結晶析出，應過濾后使用或棄用。
2、由于賴氏法的特點，在繪制標準曲線時每個點最好做 3 管的重復測定，求出各標準管的
吸光度均值，減去“0"號管吸光度均值，對照賴氏單位繪制標準曲線。
3、血清中 ALT 活性在室溫可以保存 2 天，4℃保存 1 周，-20℃保存 1 個月。
4、成批樣本測定時一般無需每份樣本都做自身血清對照，以試劑空白管代替即可。
5、對于超過正常范圍的血清樣本，應該進行復測，復測時每份樣本都應做自身血清對照。
6、嚴重黃疸、脂血或溶血的血清，可能會引起測定管吸光度增高，因此檢測該類樣本時應
做自身血清標本對照。
7、當樣本的酶活力大于 150 卡門單位時，應將樣本進行 5~10 倍稀釋后再行測定。
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