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上海雅吉生物科技有限公司

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ATCC細胞:凍存和復蘇具體步驟解析

閱讀:210      發布時間:2025-4-11
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ATCC細胞,即美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collection)提供的細胞系,是全球大的細胞庫,成立于1925年,部位于美國弗吉尼亞州ATCC致力于收集、保存和分發各種類型的細胞系,包括動物細胞、微生物細胞以及人類細胞系,廣泛應用于科學究、醫學診斷、藥物開發等領域。

ATCC細胞種類繁多,涵蓋超過1000種ATCC細胞:凍存和復蘇具體步驟解析動物細胞系和7000種微生物菌種,涉及動物、植物、微生物等多個領域,是全球科學研究的重要資源。這些細胞系經過嚴格的質量控制和驗證,包括形態學檢查、遺傳學分析和無污染檢測,確保其可靠性和純度。例如,ATCC提供的細胞系如RAW264.7、HEK293、Vero E6等,均通過了STR分析和污染檢測,用于多種生物學研究。


ATCC細胞的凍存具體步驟:

選擇對數生長期的健康細胞(此時增殖活躍),用胰酶消化貼壁細胞(懸浮細胞直接收集),離心(125g×10min)棄上清

配制含保護劑的冷凍液:無血清冷凍液(如貨號C7001)

ATCC細胞:凍存和復蘇具體步驟解析

含10% DMSO +90% FBS/培養基

重懸細胞至密度為1×10?~5×10? cells/mL

分裝至標記好的冷凍管(含細胞名稱/日期/代數),密封

程序降溫:

方法:程控冷凍儀(-1°C/min)

替代方法:

先放于-80°C冰箱24小時(用聚苯乙烯盒隔熱)

再轉入液氮氣相層長期保存(<-130°C)

ATCC細胞的復蘇具體步驟:

提前準備:

預熱培養基至37°C

調節CO?培養箱條件(通常37°C,5% CO?)

快速解:

從液氮取出冷凍管→立即浸入37°C水浴搖晃至冰晶融化(約1~2分鐘)

去除DMSO:

轉移細胞懸液至含9mL培養基的離心管

離心125g×10min棄上清(去殘留DMSO)

重懸接種:

用新鮮培養基重懸細胞→接種至培養瓶

后續觀察:

24小時后換液并評估貼壁/存活率

注:雜交瘤等敏感細**胞可能需要數天恢復


鍵注意事項:

全程無菌操作(酒精消毒冷凍管表面)

避免溫度波動:

不可將細胞存放于-80°C超過24小時

解速必須快過臨界溫區(-5~0°C)

記錄代數/狀態:

ATTC細胞超過50代建議棄用

推薦使用10代細胞實驗



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