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上海雅吉生物科技有限公司

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原代細胞實驗操作過程

閱讀:268      發布時間:2025-2-10
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培養信息:

包被條件PLL(0.1mg/ml)或明膠(0.1%)

培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態內皮細胞樣

傳代特性可傳1-2代;不建議多次傳代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5%

兔外周血來源內皮祖細胞體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的最佳培養狀態。

發貨時發送細胞電子版照片

三、使用方法

人外周血淋巴細胞是一種懸浮細胞,細胞形態呈圓形,在技術部標準操作流程下,細胞不增殖;不傳代;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態。

2. 懸浮細胞處理

1)收集T25細胞培養瓶中的培養基至50mL離心管中,用PBS清洗細胞培養瓶1-2次,收集清洗液;

2)1200-1500rpm離心3min,棄上清,收集細胞沉淀;

3)加入5mL新鮮培養基,用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞;將分散好的細胞調整合適密度接種至培養器皿中,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養;

4)若遇到懸浮細胞團塊較大,無法機械吹散時,向步驟2)中細胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中,用吸-管輕輕吹打混勻,37℃溫浴2-3min,消化結束后,加入胰

酶抑制劑(或血清)終止消化,用吸管輕輕吹打,分散細胞;1200rpm離心5min,棄上清,

收集細胞沉淀;

5)加入5mL新鮮培養基,用吸管輕輕吹打混勻;按傳代比例進行接種傳代,然后補充新鮮的培養基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養;

6)待細胞狀態穩定后,培養觀察,用于實驗;之后再按照換液頻率更換新鮮的培養基。

四、注意事項

1. 培養基于4℃條件下可保存3個月。

2. 在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。

3. 消化過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和技術部溝通;由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

5. 該細胞只可用于科研。

特殊注意事項

6. 此細胞為懸浮細胞,請注意不要直接倒掉,造成損失;懸浮細胞因多數胞體較小,離心收集時,請注意懸液中細胞是否收集,可適當加大離心轉速200轉或增加離心時間3-5min,增加細胞獲取量。

備注:由于實驗所用試劑、操作環境及操作手法的不同,以上方法僅供各實驗室參考


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