實驗原理
培養細胞傳代根據不同細胞采取不同的方法。貼壁生長的細胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細胞用直接吹打可傳代；懸浮生長的細胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打傳代。
實驗材料 細胞
試劑、試劑盒 D-Hanks液、小牛血清、RPMI1640、雙抗、胰蛋白酶、EDTA、NHCl、NaHCO3
儀器、耗材 凈化工作臺、離心機、恒溫水浴箱、冰箱、倒置相差顯微鏡、培養箱、吸管、玻璃瓶、培養瓶、吸頭、槍頭、膠塞、離心管、量加樣槍、廢液缸、紅血球計數板
實驗步驟
1. 貼壁細胞的消化法傳代：
（1）吸除或倒掉瓶內舊培養液。
（2）D-Hanks液洗2～3次。
（3）向瓶內加入適量消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養瓶，使消化液流遍所有細胞表面。
（4）然后吸掉或倒掉消化液后再加適量新的消化液，輕輕搖動再倒掉大部分消化液，僅留少許進行消化（也可不采用上述步驟直接加消化液進行消化）。
（5）消化最好在37℃或室溫25℃以上環境下進行。
（6）消化2～5 min 后把培養瓶放置顯微鏡下進行觀察，發現胞質回縮，細胞間隙增大后，應立即終止消化。
（7）吸除或倒掉消化液，如用EDTA消化，需加Hanks液數毫升，輕輕轉動培養瓶把殘留消化液沖掉。
（8）再加培養液。如僅用胰蛋白酶可直接加少許含血清的培養液，終止消化。
（9）用彎頭吸管，吸取瓶內培養液，反復吹打瓶壁細胞，吹打過程要順序進行。
（10）從培養瓶底部一邊開始到另一邊結束，以確保所有底部都被吹到，使細胞脫離瓶壁后形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔不要用力過猛。
（11） 計數，分別接種在新的培養瓶內。
2. 懸浮細胞的傳代：懸浮細胞傳代可離心收集細胞后傳代，或直接傳代。
離心傳代法：
（1） 將細胞連同培養液一并轉移到15 ml 離心管內。
（2） 離心800~1000 rpm，5 min。
（3） 棄去上清，加新的培養液到離心管內，用吸管吹打形成細胞懸液。
（4） 計數，分別接種在新的培養瓶內。
（5）直接傳代即讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清液吸掉1/2~2/3，然后用吸管吹打形成細胞懸液后再傳代。
3. 部分貼壁細胞的傳代
（1）部分貼壁不牢的細胞，如Hela細胞等，不經消化處理直接吹打可使細胞從壁上脫落下來，而進行傳代。
（2）對絕大部分貼壁生長的細胞，因直接吹打對細胞損傷較大，細胞常有較大數量的丟失，因而需消化后，才能吹打傳代。
注意事項
1. 胰蛋白酶要預溫，溫度37℃左右為宜℃。
2. 離心轉速要合適，轉速過低，不能有效分離細胞，離心速度過大，時間過長，會擠壓細胞造成損傷甚至死亡。
3. 要定時觀察細胞，發現污染，應及時處理。
發布人：上海雅吉生物科技有限公司
2
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務