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細胞復蘇后狀態不佳,該如何調整

閱讀:805      發布時間:2024-3-6
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細胞復蘇后狀態不佳,該如何調整?


細胞復蘇后狀態差的原因及解決方法,復蘇時可根據以下情況及時進行調整。

1. 細胞凍存不當

解決方法:可以嘗試調整細胞狀態,加大血清比例,后面再繼續傳代調整。


2. 自行制備的凍存細胞無活性

解決方法:制備凍存細胞時使用傳代次數少且處于對數期的細胞;提高凍存密度有助于提升復蘇存活率,推薦密度為100~300萬細胞/mL。


3. 細胞復蘇方法不當

解決方法:復蘇講究“快融",越快融化,細胞所受損傷就越小。確保冷凍細胞解凍迅速,接種前用預熱的生長培養基緩慢稀釋細胞。


4. 復蘇培養基使用不當

解決方法:確保培養基使用前已經預熱,并且盡快移除含有冷凍保護劑的培養基,防止活力下降。


5. 處理細胞時動作不夠輕柔

解決方法:凍存和復蘇過程對大多數細胞都會造成不利影響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養瓶的方法使細胞脫落(培養昆蟲細胞時除外),也不要高速離心細胞。


6. 細胞稀釋過度

解決方法:將解凍后的細胞高密度接種,以改善復蘇效果。


7. 凍存液中所用保護劑在儲存過程中未避光

解決方法:如果未避光儲存,凍存保護劑會轉變為對細胞有毒性的物質;建議新取一只凍存保護劑,重新凍存細胞。


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