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關緊取樣室內外門，并抽真空校驗
2. 接上氣路并檢查氣路，為防止漏氣，必要時可在各接管處用密封膠粘合; 使用 (一)操作室厭氧環境形成：按使用要求放置好必要的附件和器具，并向操作室內放入二個無毒塑料袋; 通電源開照明燈，開溫控儀，調節所需溫度及安全溫度;
3. 開紫外線滅菌燈，室內進行滅菌處理，滅菌時間按具體實驗.
4. 厭氧培養箱應安放在溫差較小、操作方便的位置，應避免陽光直曬和遠離采暖設備，放置平穩; 2. 將混合氣瓶、氮氣瓶安放平穩，并分別裝好減壓閥(含壓力表)，安置在適當位置;
5. 操作室內第一次置換(氮氣置換)： A. 先用橡皮管插入操作室內進氣口，另一頭插入塑料袋; B. 接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥，使二只塑料袋充足氮氣，關閉閥門 1，然后扎緊袋口; C. 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊; D. 把塑料袋內氮氣漸漸放于操作室內，至全部放出。
6. 操作室內打開粑粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一小時后開美蘭指示劑,觀察其變色情況，不變色為操作室內達到厭氧環境;
7. 操作室第三次置換(混合氣體置換)： A.調換氣路打開混合氣閥進氣，充氣時取樣室先抽真空，并隨時用腳踏開關開閉排氣; B.混合氣充滿塑料袋后，關掉混合氣閥，并打開閥，使混合氣經過流量計，調整流量計，流量為每分鐘10ml左右; C. 把塑料袋內混合氣漸漸排于操作室內; D. 通過三次換氣后，操作室內氣體含氧量已處于極微量狀態。
8. 操作室第二次置換(氮氣置換)重復一次充氮過程，取樣室先抽真空，并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。