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ELISA試劑盒的血清標(biāo)本收集及檢測樣品的處理方法-睿創(chuàng)生物

時間:2023/8/29閱讀:863
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ELISA試劑盒的血清標(biāo)本收集及檢測樣品的處理方法


一、血清標(biāo)本收集:


1. 因此在ELISA試劑盒測定中試劑的預(yù)備最為樞紐的是,在實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。


2. 加血清樣本及反應(yīng)試劑在現(xiàn)在的ELISA試劑盒中,血清樣本加入要使用微量加樣器加入樣本的步驟。


3. 溫育是ELISA測定中影響測定成敗最為樞紐的一個因素。目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要留意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很輕易泛起重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)泛起非特異吸附,從而引起非特異顯色。


4. 如可的松在早晨4~6點(diǎn)之間,會有一峰值泛起:生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式開釋。


5. 因此,在測定此類激素時,ELISA試劑盒要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,以知足測定要求。再如治療藥物的檢測,應(yīng)根據(jù)藥代動力學(xué)選擇服藥后的最適時間抽血檢測。


6. 溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。使用微量加樣器加樣必需留意的樞紐點(diǎn)是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,ELISA試劑盒不可濺出和產(chǎn)氣憤泡。對用于激素和治療藥物測定,要留意收集時間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。


二、檢測樣品的處理方法:


1.通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的第一步,下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理方法。


2.總的來說,因?yàn)镋LISA只能檢測可溶性蛋白的含量,所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體,沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。


3.為了保證檢測的準(zhǔn)確性,保存于-20℃或-80℃的樣本最好在1~6個月內(nèi)檢測;4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。


4.另外,還應(yīng)保證樣本不含NaN3,因?yàn)镹aN3會抑制HRP的活性,從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。

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