細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒
MCE 國際站：Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit (PI staining)
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：4℃ 保存 6 個月或者 -20℃ 保存一年。避光保存
簡介：MCE 細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒采用碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）染色的方法檢測細胞周期和細胞凋亡。
概述：MCE 細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒采用碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）染色的方法檢測細胞周期和細胞凋亡。PI 是一種可嵌合到雙鏈 DNA 和 RNA 堿基對間的紅色熒光染料，與雙鏈 DNA 結合后可產生熒光，且熒光強度與雙鏈 DNA 的含量成正比。PI 染色后，假設 G0/G1 期細胞的熒光強度為 1，則含有雙份基因組 DNA 的 G2/M 期細胞的熒光強度理論上為 2，正在進行DNA 復制的 S 期細胞的熒光強度為 1-2。細胞凋亡時，由于細胞核皺縮和DNA 片段化，部分基因組 DNA 片段在染色過程中丟失，故經 PI 染色后熒光強度小于 1，經流式細胞儀檢測后會出現 sub-G1 峰，即凋亡細胞峰。此外，細胞凋亡時，細胞的光散射情況也會發生變化，在凋亡早期，染色質皺縮，細胞密度增加，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，而對側向角光散射能力增加或不變；但到了凋亡晚期，細胞產生凋亡小體，前向角和側向角光散射的信號均會降低。故可采用流式細胞儀對細胞 DNA 含量及光散射情況進行測定。本試劑盒可用于懸浮細胞和貼壁細胞的檢測，也可用于組織細胞的檢測。本試劑盒可檢測 50 個樣品，每個樣品的細胞數量可為105-106 個。
描述：
MCE 細胞周期及凋亡分析試劑盒（PI 染色）為檢測細胞周期及細胞凋亡提供了一種便捷的方法。DNA 的含量隨著細胞周期的進程而變化。DNA 可用熒光染料如碘化丙啶 (PI) 染色，通過流式細胞術測量其強度，以監測 G1/S/G2/M 期的細胞周期分布以及在亞 G1 區有信號的凋亡細胞。PI 是一種熒光插入劑，它通過插入堿基之間與 DNA 結合，幾乎沒有或沒有序列偏好。然而，PI 也與 RNA 結合，本試劑盒提供的 RNase A 可以消除 RNA 干擾。此外，光散射也會在細胞凋亡過程中發生變化。在早期細胞凋亡中，來自前向散射 (FSC) 的光信號變弱，來自側向散射 (SSC) 的信號增加或保持不變。當細胞進入晚期細胞凋亡階段時，來自 FSC/SSC 的信號均會減少。
操作說明：1. 收集細胞懸浮細胞：在 1.5 mL 離心管中加入約 105-106 個細胞。4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清。加入 1 mL 預冷的 PBS 重懸細胞，4℃，1000 g 離心 3-5 min后棄去上清，保留細胞沉淀。貼壁細胞：棄去細胞培養液。加入胰蛋白酶消化細胞，制備單細胞懸液。4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清。加入 1 mL 預冷的 PBS 重懸細胞，4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清，保留細胞沉淀。組織細胞:用剪刀將組織塊剪成盡可能小的小塊,加入胰蛋白酶消化0.5-1h后經 200-400 目篩網過濾得到單細胞懸液。4°C,1000g離心3-5 min,棄去上清。加入1mL預冷的PBS重懸細胞,4C,1000g離心3-5min,棄去上清，保留細胞沉淀。2.固定細胞在上述收集的細胞沉淀中加入1mL預冷的 70%乙醇,輕輕吹打混勻,4℃固定2h或更長時間。注:4C固定 12-24h效果更佳。3.清洗細胞4C,1000g離心3-5 min,棄去上清。加入1mL預冷的 PBS 重懸細胞,4C,1000g離心 3-5 min,棄去上清,保留細胞沉淀。4.配制PI染色工作液根據待測樣品數量配制適量的PI染色工作液。注:PI染色工作液4℃避光保存備用,24h有效。5.染色每個細胞樣品中加入0.5 mL PI染色工作液,輕輕重懸細胞沉淀,37C避光孵育30 min。6.檢測與分析用流式細胞儀在激發波長488 nm處檢測紅色熒光,并檢測光散射情況。用適當軟件對DNA含量及光散射進行分析。
注意事項：1. 熒光染料存在淬滅的問題，染色后應盡快檢測熒光強度。2. PI 對光敏感，整個實驗過程盡量避光下進行。3. PI 對人體有害，操作時務必小心。4. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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