G418 選擇性抗生素無菌溶液
MCE 國際站：G418 Selective Antibiotic, Sterile
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20°C 保存 2 年
簡介：MCE G418 Selective Antibiotic, Sterile 是一種氨基糖苷類抗生素，主要通過影響 80S 核糖體的功能來干擾蛋白質的合成，對細菌、酵母、高等植物、哺乳動物細胞等均有毒性。
概述：MCE G418 選擇性抗生素，滅菌（G418 Selective Antibiotic, sterile）是已過濾除菌，可直接用于細胞培養的溶液。G418 選擇性抗生素是一種氨基糖苷類抗生素，主要通過影響 80S 核糖體的功能來干擾蛋白質的合成，對細菌、酵母、高等植物、哺乳動物細胞等均有毒性。G418 抗性基因（neo gene）位于轉座子 Tn5 或 Tn601 (903)。在 Tn5 上成為氨基糖苷磷酸轉移酶 3 (II) 或 APH (3) II，而在 Tn601 上則成為氨基糖苷激酶 3 (I) 或APH (3) I。這些基因來源于細菌，但也可以在真核細胞中表達。將任一抗性基因導入細胞可使細胞獲得 G-418 抗性，從而用來篩選和維持培養攜帶抗性基因的原核或者真核細胞。
描述：
G418 選擇性抗生素是由紅花小單孢菌產生的氨基糖苷類抗生素。它通過與細菌核糖體的 80S 亞基結合而起作用，從而抑制原核和真核細胞中的蛋白質合成。
對 G418 選擇性抗生素的抗性是由大腸桿菌 APH (3) I 和 APH (3) II 抗性基因賦予的。該基因在 Tn5 上變為 APH (3) II，在 Tn601 上變為 APH (3) I。因此，G-418 選擇性抗生素可用于選擇和維持攜帶 G418 抗性基因的原核或真核細胞。
操作說明：1. G418 選擇性抗生素溶液的工作濃度需要根據細胞類型、培養基、生長條件和細胞代謝率而適當調整。2. 對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve）來確定最佳篩選濃度：1）以 20-25% 的細胞密度鋪板，鋪足夠量的孔以進行后續的梯度實驗，37℃ 培養過夜。2）準備含梯度濃度 G418 選擇性抗生素的新鮮培養基為篩選培養基，至少 5 個梯度。以哺乳動物為例，常用濃度為 50-1000 μg/mL，可設定 0、50、100、200、400、800、1000 μg/mL。3）細胞過夜培養后，使用上述配制的篩選培養基替換舊培養基，孵育細胞。每個濃度做 3 個平行對照。4）約 2-3 天更換新鮮的篩選培養基。5）每日監測細胞，觀察活細胞比例。通常 7-10 天內能夠殺死絕大多數細胞的低濃度為篩選用的工作濃度
注意事項：1. 盡量減少反復凍融的次數，以免效價降低。2. 注意無菌操作，避免污染。3. 本產品的工作濃度是針對含血清的基礎培養基而設定的，在無血清培養基中使用時應適當減少用量，以免造成細胞毒性。4. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療。5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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