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小鼠 CD4+ T 細胞陰性分選試劑盒

MCE 國際站：Mouse CD4+ T Cells Negative Selection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件：4℃，2 年磁珠禁止凍結

簡介：MCE 小鼠 CD4+ T 細胞陰性分選試劑盒可以從小鼠脾臟細胞、淋巴結或其它組織的單細胞懸液中分離出 CD4+ T 細胞。

概述：MCE 小鼠 CD4+ T 細胞陰性分選試劑盒可以從小鼠脾臟細胞、淋巴結或其它組織的單細胞懸液中分離出 CD4+ T 細胞。原理為生物素 (biotin) 標記的單克隆抗體對非目標細胞（非 CD4+ T 細胞）進行標記，再通過鏈霉親和素 (streptavidin) 標記的磁珠對非目標細胞進行去除，從而達到小鼠 CD4+ T 細胞分選的目的。MCE 小鼠 CD4+ T 細胞陰性分選試劑盒操作簡單便攜，各成分對細胞均無毒性，且可實現高純度細胞分離的目的，分離的細胞可用于下游應用，例如流式細胞術、細胞培養、Western blot 分析、免疫沉淀、報告基因檢測或 DNA/RNA 提取等。MCE 小鼠 CD4+ T 細胞陰性分選試劑盒具有如下優點：簡單快速：15 min 即可分選得到目的細胞；無需分離柱：使用磁性分離器即可實現目的細胞的快速分離；高純度：分選細胞純度可達 95% 以上；高活性：分選后獲得 99% 以上的活細胞，且細胞功能良好可用于下游實驗。

描述：

MCE 小鼠 CD4⁺ T 細胞負選試劑盒用于從小鼠脾細胞、淋巴結或其他組織的單細胞懸浮液中分離 CD4⁺ T 細胞。其原理在于利用生物素標記的單克隆抗體標記非靶細胞（非 CD4⁺ T 細胞），隨后使用鏈霉親和素標記的磁珠去除這些細胞。此過程可有效促進人類 CD4⁺ T 細胞的分選。

該試劑盒易于使用且便于攜帶，其成分對細胞無毒。它能夠分離高純度細胞，所得細胞可用于各種下游應用。這些包括流式細胞術、細胞培養、蛋白質印跡分析、免疫沉淀 (IP)、報告基因檢測和 DNA/RNA 提取。

MCE 小鼠 CD4⁺ T 細胞負選試劑盒的特點

效率：快則 15 分鐘即可對目標細胞進行分選；

無需分離柱：使用磁分離器快速分離細胞，無需使用分離柱；

高純度：可獲得純度超過 97% 的分選細胞；

高活性：分選后的細胞不含抗體和磁珠標記，并保留高活性和功能性以用于下游實驗。

操作說明：以分選小鼠脾臟CD4+ T細胞為例1. 制備小鼠脾臟單細胞懸液：在 70 μm 細胞篩網上研磨脾臟，以預冷的 PBS 沖洗細胞篩網，收集細胞懸液于 50 mL 離心管中，500 × g 離心 5 min，棄上清。2. 加入 5 mL 紅細胞裂解液 (ACK)，室溫裂解 5 min，再加入 20 mL PBS重懸細胞，500 × g 離心 5 min，棄上清。注：a. 紅細胞裂解步驟可根據所用裂解液的不同調整用量及時間。b. 少量紅細胞殘留不會影響后續分選及細胞純度。3. 用 PBS 重懸細胞，細胞懸液用 70 μm 細胞篩網過濾后，計數。計數完成后，500 × g 離心 5 min，棄上清。注：細胞懸液需要過細胞篩網，以除去組織和細胞團塊，否則會影響后續細胞分選純度。4. 用分選緩沖液重懸細胞，調整細胞密度為 1 × 108 cells/mL。5. 取 100 μL 細胞懸液 (1 × 107 個細胞）加入無菌流式管底部，再加入 2 μL Biotin-Antibody Mix，混勻后 4°C 孵育 10 min。注：a. 細胞懸液直接加入流式管底部，避免沿流式管管壁加入。b. 根據所使用磁性分離器不同也可使用離心管進行細胞分選。c. 如果分選更多細胞，可按比例增加 Biotin-Antibody Mix 的用量。6. 磁珠準備：充分重懸 Streptavidin Magnetic Beads，取 20 μL 至 1.5 mL EP管中，加入 1 mL 分選緩沖液，10,000 × g 離心 1 min，棄上清。重復洗滌磁珠 1 - 2 次，加 20 μL 分選緩沖液重懸磁珠。注：磁珠重懸分選緩沖液的用量與初始吸取磁珠體積需一致。7. 細胞-抗體孵育完成后，在流式管中加入 20 μL 清洗過的磁珠，混勻后 4°C 孵育 10 min。注：如果分選更多細胞，則按比例增加磁珠用量。例如分選 5 × 107個細胞，在 500 μL 細胞懸液中加入 10 μL Biotin-Antibody Mix 和 100 μL 磁珠。如果分選少于 1 × 107 個細胞，則將細胞懸液體積補至 100 μL，加入 2 μL Biotin-Antibody Mix和 20 μL 磁珠。8. 孵育完成后，在流式管中加入 2.5 mL 分選緩沖液，用移液器輕柔吹吸混勻（避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻）。9. 將含有細胞的分選流式管置于磁性分離器上，磁性分離 5 min。10. 將細胞懸液轉移至無菌離心管中（傾倒過程中流式管不可脫離磁性分離器），此細胞懸液中即包含純化的小鼠 CD4+ T 細胞，500 × g 離心 5 min。離心后棄上清，收集細胞。注：轉移過程中避免槍頭接觸磁珠，也可通過傾倒法收集細胞懸液。11. 根據實驗需要洗滌細胞，將細胞重懸于所需緩沖液或培養基中，即可用于后續分子生物學或細胞生物學實驗。

注意事項：1. 抗體混合液使用和保存過程中均應避免反復凍融、高速離心等操作。2. 建議選用低吸附移液器吸頭和離心管等耗材，避免因吸附造成磁珠和抗體的損耗。3. 磁珠在使用和保存過程中應避免高速離心、干燥或凍存；磁珠禁止長時間置于磁場，否則會引起磁珠聚團結塊，降低其結合活性。4. 從磁珠保存管中吸取磁珠前應充分振蕩混勻，操作過程中動作應輕柔，并避免產生氣泡。5. 本品需要與磁性分離器配套使用。6. 實驗操作過程需輕柔，避免對細胞造成機械損傷。7. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。8. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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