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幾種常見的將細胞接種到玻片上的方法

時間：2025/2/24閱讀：498
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以下是幾種常見的將細胞接種到玻片上的方法：
一、直接滴加法
  1. 準備工作
    • 首先要準備好細胞懸液。細胞懸液可以通過消化貼壁細胞獲得，例如對于貼壁生長的細胞，用胰蛋白酶 - EDTA 消化液處理細胞，使細胞從培養瓶壁上脫落，然后加入適量的培養基終止消化，并輕輕吹打制成單細胞懸液。對于懸浮細胞，可以直接收集培養基中的細胞，離心去除培養基中的雜質和舊培養基后，用新鮮培養基重懸細胞。
    • 選擇合適的蓋玻片。蓋玻片一般需要進行消毒處理，可以用 70% - 95% 的乙醇浸泡 30 分鐘左右，然后晾干備用。蓋玻片的大小和厚度根據實驗需求選擇，一般常用的尺寸為 18mm×18mm，厚度在 0.17mm 左右。
  2. 接種操作
    • 將蓋玻片放置在培養皿中。培養皿底部可以預先加入少量的培養基，以防止蓋玻片移動。
    • 用微量移液器吸取適量的細胞懸液（一般根據細胞密度和實驗需求，細胞濃度可能在 1×10? - 1×10? 個 /ml 之間），滴加在蓋玻片的一端。滴加的細胞懸液體積一般在 10 - 50μl 左右，具體體積取決于蓋玻片的大小和細胞所需的接種面積。
    • 輕輕傾斜培養皿，使細胞懸液沿著蓋玻片緩慢流下，均勻地分布在蓋玻片表面。然后將培養皿放入培養箱中，讓細胞在適宜的溫度（如 37℃）和二氧化碳濃度（一般為 5%）環境下附著和生長。
二、使用細胞爬片法
  1. 準備工作
    • 和直接滴加法類似，準備好細胞懸液和消毒后的蓋玻片。
    • 在細胞培養容器（如培養瓶或培養皿）中加入適量的培養基，其量要能夠保證細胞在接種后有足夠的營養環境。
  2. 接種操作
    • 將蓋玻片平放在細胞培養容器底部。注意蓋玻片之間不要相互重疊，并且要確保蓋玻片表面平整。
    • 將細胞懸液加入到培養容器中，細胞會自然地附著在蓋玻片上。在培養過程中，隨著細胞的生長和增殖，它們會逐漸在蓋玻片上形成單層（對于貼壁細胞）或聚集（對于懸浮細胞）。
    • 定期更換培養基，以維持良好的細胞生長環境。一般每隔 2 - 3 天更換一次培養基，直到細胞生長到合適的密度，可以進行后續的實驗操作，如免疫熒光染色、細胞固定等。
三、利用細胞接種器
  1. 準備工作
    • 準備好細胞懸液和經過消毒處理的蓋玻片。同時，準備好細胞接種器，這是一種專門用于將細胞均勻接種到玻片上的工具，其設計可以精確控制細胞接種的量和分布。
  2. 接種操作
    • 將蓋玻片放置在細胞接種器的位置。接種器通常有一個固定蓋玻片的裝置，以確保在接種過程中蓋玻片不會移動。
    • 將細胞懸液加入到接種器的細胞懸液槽中。根據接種器的使用說明，調整細胞懸液的加入量和接種參數，如接種速度、接種壓力等。
    • 啟動細胞接種器，它會將細胞懸液均勻地噴灑或涂抹在蓋玻片表面。這種方法可以得到非常均勻的細胞分布，適用于一些對細胞分布均勻性要求較高的實驗，如高通量藥物篩選實驗中的細胞接種。


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