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HA-Agarose 免疫沉淀試劑盒（PROCAP HA-Agarose IP/CoIP KIT）
貨號：PHA025
存儲條件：-20°C保存，HA-Agarose beads經常使用可在4℃保存，-80或-20℃長期保存，避免反復凍融。
試劑盒組分：
貨號 | 名稱 | 規格 |
HNA-25-500 | HA-Nanoab-Agarose | 500ul(25T) |
IP001A | 裂解液A | 30ml |
IP001B | 裂解液B | 30ml |
IP001C | 漂洗液C | 30ml |
IP001D | 漂洗液D | 30ml |
IP001E | 洗脫液E | 3x1ml |
產品簡介：
LABLEAD的免疫沉淀beads是基于基因工程改造的納米抗體開發的；納米抗體由傳統抗體的重鏈可變區（VHH）組成，具有分子量小、親和力高、特異性強，且耐酸堿高溫環境等特點；基于納米抗體的優點，LABLEAD的免疫沉淀beads避免了免疫沉淀結果出現輕重鏈污染的現象，并且節省實驗時間。
實驗步驟：
提示：盡量在4℃進行操作，洗脫蛋白方法一除外。
1.植物組織裂解處理：
取適量植物組織樣本（葉片等）放置于冷凍液氮中，之后將冷凍后得植物組織樣本放于研缽進行研磨，盡可能充分研磨破壞其細胞壁。加入500-1000ul 裂解液A或裂解液B（需加入PMSF溶液）進行裂解，為了提高裂解效率，可加入 200ul 玻璃粉按照600-800g離心力充分震蕩 30min，裂解完成后 12000 rpm，離心 30min，吸取上清置于新的離心管中，棄去沉淀。（進行第3步）
2. 動物細胞
2.1 收集細胞：
根據實驗要求收集適量的細胞，通常每個免疫沉淀反應大約使用 106-107 個細胞。
2.2 裂解細胞：
根據實驗要求選擇使用溶液A或溶液B裂解細胞。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑制劑，用500μl預冷的溶液A或溶液B重懸細胞；置于冰上30分鐘，可每10分鐘充分吹打一次；細胞裂解物4℃，20,000g離心15分鐘，將裂解產物（上清）轉移到一個新的預冷管中，丟棄沉淀。
3. 平衡珠子：
振蕩充分混勻珠子， 吸取20μl HA-Nanoab-Agarose beads到500μl預冷的溶液A或溶液B中，4℃，2,500g離心2分鐘，丟棄上清液。
4. 結合蛋白：
將平衡好的beads加入到細胞裂解產物中，于4℃旋轉混合結合30min-1h。
5. 清洗珠子：
根據實驗要求選擇使用溶液C或溶液D清洗beads。4℃，2,500g 離心2分鐘，丟棄上清液。用500μl預冷的溶液C或溶液D重懸beads，4℃，2,500g條件下離心2分鐘，丟棄上清液并重復洗滌3次。
6. 洗脫蛋白
方法一：
加入20μl 2×SDS-sample buffer重懸beads。95℃，加熱10min充分變性，2,500g離心2分鐘收集上清，收集的產物可進行SDS-PAGE及免疫印跡分析。
方法二：
加入溶液E洗脫結合的蛋白，孵育時間30秒，期間不斷混勻，2,500g離心2分鐘收集上清，為了中和酸性的甘氨酸，立即加入5μl 1.0 M Tris（pH10.4）。
注意：為了提高洗脫效率可以重復這一步。收集的產物可進行SDS-PAGE及免疫印跡分析。
注意事項：
1、關于裂解液與裂解液的選擇：
裂解液A為溫和裂解液，裂解液B為強裂解液，請根據自己實驗樣本選擇相應的裂解液，如：若為胞質蛋白可選裂解液A或者A與B混合使用，若為核蛋白則可選擇裂解液B。
漂洗液C和漂洗液D的選擇：（裂解液D為高鹽溶液，可能會破壞蛋白間較弱的相互作用），若兩個蛋白相互作用強，同時還想減少非特異性結合，可選D；若兩個蛋白相互作用弱的優先C。
2、為取得好的使用效果，盡量避免過多的反復凍融。可以適當分裝后使用。
3、本產品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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