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詳解人正常組織來源細胞培養的步驟
閱讀：413 發布時間：2017-9-25人正常組織來源細胞培養的步驟：取材→分離→培養和維持
1、取材
人和動物細胞的取材是原代細胞培養成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養。
(1) 取材的基本要求
① 取材要注意新鮮和保鮮
② 應嚴格無菌
③ 防止機械損傷
④ 去除無用組織和避免干燥
⑤ 應注意組織類型、分化程度、年齡等
⑥ 作好記錄
(2)各類組織的取材技術
① 皮膚和粘膜的取材
主要取自于手術過程中的皮片，方法似外科取斷層皮片手術操作，但面積一般2~4平方厘米。
② 內臟和實體瘤的取材
內臟除消化道外基本是無菌的，但取材時要明確和熟悉所需組織的類型和部位，實體瘤取材時要取腫瘤細胞豐富的區域，要避開破潰、壞死液化部分，以防污染，盡量去除混雜的結締組織。
③ 血液細胞的取材
血細胞、淋巴細胞的取材，一般多抽取靜脈外周血，或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結等)分離細胞，取材時應注意抗凝。
④ 骨髓、羊水、胸/腹水細胞取材
嚴格無菌，注意抗凝，還要盡快分離培養，離心后，用無鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養液洗一次后即可培養，不宜低溫存放。
⑤ 動物組織取材
I 鼠胚組織取材
首先用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物，然后將其整個浸泡在含有75%酒精的燒杯中，5分鐘后(注意時間不能太長，以避免酒精從口或其他通道進入體內，影響組織活力)，取出動物，在消毒過的木板上可用無菌的圖釘或大頭針固定四肢，切開皮膚，用無菌操作法解剖取胚或用無菌止血鉗挾起皮膚、用無菌眼科剪沿軀干中部環形剪開皮膚，用止血鉗分別挾住兩側皮膚拉向頭尾，把動物反包，暴露軀干，然后再固定，更換無菌解剖器材，采用無菌操作法解剖取出胚胎。
II 幼鼠胚腎(或肺)取材
幼鼠采用上述方法處死消毒后，腹部朝上固定在木板上，先切開游離毛皮并拉開至兩側：然后采用無菌法打開胸腔取肺，或背部朝上固定在木板上，先將背部毛皮切開游離并拉向兩側，然后采用無菌法從背部打開腹腔取腎。
⑥ 雞(鴨)鳥類胚胎組織取材步驟
1、取孵化至適當胚齡(9~12天)的胚蛋，用照蛋燈在暗處燈檢，若有人正常組織來源細胞豐富血管、胚體有運動的胚蛋，說明胚體發育良好，并用有色筆劃出氣室和胚體位置。
2、將胚蛋置于蛋架上，先用溫水清洗蛋殼，再用75%酒精棉球擦干;
經碘酒、75%酒精消毒后，在無菌條件下采用無菌法用剪刀或鑷子打開氣室，沿氣室邊緣去除蛋殼;
3、用眼科鑷撕去殼膜，暴露出雞胚;
4、用彎頭鑷輕挑起胚頭，取出胚胎，放入無菌平皿中，解剖取材。
規格: 格列美脲相關物質A標準品 20mg
規格: 119018-29-0 格列美脲相關物質B標準品 20mg
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