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一、產品簡介
貨號：SN3001
本試劑盒采用陰選的方式，通過無柱磁極分離人PBMC中的CD19 B細胞。分離過程中抗體和磁珠不會接觸CD19 B細胞，能夠最大限度保持B細胞最原始的狀態。
• 操作簡便
• 純度最高可達99%
• 18-20分鐘完成分離
試劑盒通過生wu素偶聯的抗體標記非CD19 B細胞，再將細胞和鏈霉親和素納米磁珠孵育偶聯，然后通過磁極進行無柱分離。目標細胞只需倒入一個新的管中即可分離，分離后的細胞可立即用于后續應用，如流式細胞術、細胞培養和功能實驗等。
二、試劑盒組分
產品名稱 | 存儲條件 | 緩沖液成分 | 功能 |
EasyIso™ Human FcR Blocker | 4°C保存，避免冷凍 | PBS, 0.1% BSA | 封閉FcR受體，降低抗體非特異性結合 |
EasyIso™ Human CD19 B cell Isolation Cocktail | 4°C保存，避免冷凍 | PBS, 0.1% BSA | 識別非CD19 B細胞抗體混合液，標記非目的細胞 |
EasyIso™ Streptavidin Nanobeads | 4°C保存，避免冷凍 | PBS, 0.1% BSA | 磁珠結合非CD19 B細胞，通過磁極去除 |
BSA - bovine serum albumin; PBS - phosphate-buffered saline
運輸條件： 4°C運輸
三、設備和試劑要求
· 緩沖液：FACS Buffer (1 x PBS+0.02% EDTA+2% FBS)
· 耗材：70 μm無菌尼龍濾網；無菌離心管
· 儀器：離心機，磁力架
溫馨提示
· 推薦采用淋巴細胞分離液進行密度梯度離心分離PBMC，不建議采用紅細胞裂解液
· 采用FACS Buffer而不是PBS進行操作，能夠提高細胞得率
· 確保FACS Buffer滲透壓穩定，免疫細胞較為敏感
· 確保每一步無菌操作，謹防污染
四、操作步驟
步驟 | 說明 | 劑量和時間 |
1 | 準備PBMC單細胞懸液至指定濃度 | 1 x 10^8 cells/mL |
2 | 加入EasyIso™ Human FcR Blocker至樣品中 | 100 μL/mL |
3 | 加入EasyIso™ Human CD19 B cell Isolation Cocktail至樣品中 | 100 μL/mL |
4 | 抗體和細胞孵育 | 常溫孵育10 min |
5 | 震蕩混勻 Streptavidin Nanobeads | 混勻30 s |
6 | 加Streptavidin Nanobeads至樣品中 | 100 μL/mL |
7 | 輕柔混勻磁珠和細胞，孵育 | 常溫孵育5 min |
8 | 加入FACS Buffer到樣品中，輕輕混勻 | 總體積加入至2.5 mL （5 mL流式管） 總體積加入至 7.5 mL (15 mL離心管) |
9 | 樣品置于磁力架上，使磁珠吸附 | 單孔磁力架吸附（3 min） 聯排磁力架吸附（5 min） |
10 | 傾斜磁力架，將樣品倒入新的收集管中，收集樣品 | 細胞分離成功 |
五、數據展示：
如圖：采用Immuno-X系列產品（SN3001#）分離PBMC中的CD19 B 細胞并進行體外培養。（A）采用（#SN3001）分離健康人PBMC中CD19 B細胞，采用CD3和CD19的流式抗體進行染色（B）分選后的CD19 B細胞純度高達97.4%。
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