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同型對照抗體是什么?如何使用?

閱讀:770      發布時間:2024-10-17
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一、什么是同型對照抗體?


同型對照抗體是一種與檢測抗體(一抗)相同種屬、相同種型(和亞類)、具有相同標記物的但對目標抗原無特異性識別能力的一抗。

檢測抗體同型對照抗體唯1的區別在于對待測樣本中目標抗原的特異性識別能力。檢測抗體能在代測樣本中特異性識別并結合目標抗原,而同型對照抗體不會特異性結合任何存在待測樣本中的抗原,其他屬性二者是完權一致的。

二、為什么需要同型對照抗體?

在流式細胞術(FC)和免疫組織化學(IHC)等實驗中,有很高的背景染色風險,我們會發現抗體與細胞的結合,可以通過不止抗體-抗原特異性結合這一種方式。

比如 B細胞、巨噬細胞、單核細胞和樹突狀細胞等細胞表面會表達Fc受體,它能夠非特異性結合抗體Fc端,將抗體標記在非目標細胞上;還有一些脂質和碳水化合物等,他們也可以通過非特異的方式與抗體結合。這些非特異性結合對于我們的實驗而言,就是一種干擾信號,造成實驗結果的不準確甚至錯誤。

因此,為了評估非特異性背景信號對染色結果的貢獻并區分非特異性和特異性抗體染色,同型對照是非常有必要的。

三、如何選擇和使用同型對照抗體?

在選擇上,同型對照抗體必須與所使用的檢測抗體(一抗)的相匹配,須來源于相同物種,具有相同種型和Ig亞類,并具有相同標記物。比如,如果你使用PE標記的兔重組單克隆抗體,那你應該使用PE偶聯的兔IgG同型對照抗體作為對照。

在使用上,同型對照組用同型對照抗體代替一抗,其他實驗條件與實驗組均相同,包括:工作濃度(μg/ml)、溫度、孵育和檢測方法。

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