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索萊寶Solarbio小鼠骨髓淋巴細(xì)胞分離液試劑盒(P6040)現(xiàn)貨供應(yīng)

閱讀:581      發(fā)布時(shí)間:2024-4-11
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產(chǎn)品名稱:索萊寶Solarbio小鼠骨髓淋巴細(xì)胞分離液試劑盒(P6040)現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號(hào):P6040

產(chǎn)品品牌:索萊寶

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

規(guī)格

200mL/KIT

有效期

2

儲(chǔ)存條件

RT,避光

單位

產(chǎn)品組成:

各種動(dòng)物脾臟淋巴細(xì)胞分離液

200mL

全血及組織稀釋液

200mL

細(xì)胞洗滌液

200mL

實(shí)驗(yàn)流程:

淋巴細(xì)胞分離方法(僅供參考)

1. 制備脾臟的單細(xì)胞懸液。

2. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管,加入與脾臟單細(xì)胞懸液等量的分離液(分離液最少不得少于3 mL,總體積不能超過離心管的三分之二,否則會(huì)影響分離效果)。

3. 小心吸取單細(xì)胞懸液加于分離液液面上,注意保持兩液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取單細(xì)胞懸液,然后小心的平鋪于分離液上,因?yàn)閮烧叩拿芏炔町悾瑢⑿纬擅黠@的分層界面。)

4. 室溫,水平轉(zhuǎn)子500~900g,離心20~30min。(根據(jù)脾臟單細(xì)胞懸液的量確定離心條件,單細(xì)胞懸液量越大,離心力越大,離心時(shí)間越長(zhǎng),具體離心條件可以自行摸索,以達(dá)到最佳分離效果)。

5. 離心后,此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分四層。第一層為稀釋液層;第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層;第三層為透明分離液層;第四層為紅細(xì)胞層。

6. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞至另一潔凈的 15mL離心管中,向離心管中加入10ml細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞,250g,離心10min

7. 棄上清,5mLPBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞,250g,離心 10min

8. 重復(fù)步驟7

9. 棄上清,細(xì)胞重懸備用。

骨髓單細(xì)胞懸液的制備方法(僅供參考)

小動(dòng)物骨髓的采集:

1. 處死動(dòng)物,無菌提取股骨和脛骨,剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔(注意盡可能少的剪走骨髓腔)。

2. 1ml的無菌注射器,吸取少量的含有10%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的稀釋液或者是含有血清的培養(yǎng)基,沖洗骨髓腔以獲得骨髓。

3. 最終制備成2×1081×109 /ml 的單細(xì)胞懸液備用。大動(dòng)物骨髓的采集:大動(dòng)物骨髓的采集可采取活體穿刺方法:先將動(dòng)物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚,然后估計(jì)好皮膚到骨髓的距離,把骨髓穿刺針的長(zhǎng)度固定好。操作人員用左手把穿刺點(diǎn)周圍的皮膚繃緊,右手將穿刺針鉆入,當(dāng)穿刺針進(jìn)入骨髓腔時(shí)常有落空感。連接注射器緩慢抽吸骨髓組織,當(dāng)注射器內(nèi)抽到少許骨髓時(shí)即停止抽吸。用含10%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的稀釋液調(diào)整細(xì)胞濃度為2×108-1×109 /mL的單細(xì)胞懸液備用。

相關(guān)文獻(xiàn):

[1] Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 1968; 97: 7.

[2] Ting A, Morris PJ. A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. Vox Sang. 1971 Jun; 20(6): 561-3.

[3] Boyum A. Separation of Blood Leucocytes, Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens. 1974; 4(4): 269-74.

[4] Weisbart RH, Webb WF, Bluestone R, Goldberg LS. A simplified method for lymphocyte separation. Vox Sang. 1972; 23(5): 478-80.

歡迎訂購(gòu):

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

P6040

Mouse bone marrow lymphocyte isolation liquid kit

200mL/KIT


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