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百奧醫(yī)藥骨組織解離試劑盒的使用方法

閱讀:795      發(fā)布時間:2024-1-18
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百奧醫(yī)藥骨組織解離試劑盒可用于骨組織樣本單細胞懸液制備,可廣泛應用于高通量單細胞測序等相關科學研究實驗。那么你知道百奧醫(yī)藥骨組織解離試劑盒的使用方法是什么嗎?讓我們一起來看看吧!

一、使用方法:

1、用滅菌的剪刀或手術剪將組織切成小塊

2、在冰上將組織塊兒加入適當?shù)腞PMI 1640培養(yǎng)基或PBS緩沖液,清洗至少3次,去除多余xue漬和雜質(zhì)

3、將洗干凈的組織剪碎,剪的越碎越好,增大和消化試劑接觸的面積。加入適量的消化試劑。顛倒混勻。

4、放置于酶作用的最佳溫度下,一般37°C,進行孵育,每隔5分鐘震蕩混勻。

5、不同類型、狀態(tài)的組織消化時間不同,每隔一定的時間質(zhì)檢一次細胞懸液,根據(jù)細胞總量及活性等確定消化停止時間。對于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織,消化時間4~48h,對于容易消化的組織可以采用37°C 消化15-45分鐘,也可以根據(jù)具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀,一經(jīng)搖動即成細胞團或單個細胞,可以認為已消化充分。

6、消化完成后,用合適的細胞篩進行過濾,收集濾液。

7、讓細胞沉降并倒出多余的含酶液體。

8、用PBS緩沖液洗滌并重復2-3次。加入適當?shù)呐囵B(yǎng)基或緩沖液,重懸細胞。

9、用細胞計數(shù)儀對細胞懸液進行質(zhì)控并記錄

二、測試效果

使用該組織解離試劑盒將新鮮人骨組織消化解離為單細胞懸液,利用CountStar全自動細胞熒光分析儀檢測細胞活性(AO/PI染色)、結(jié)團率、活細胞濃度、細胞直徑等參數(shù)。然后進行10x Genomics平臺單細胞建庫測序,獲取數(shù)據(jù)。

制備的單細胞懸液質(zhì)量較高,活性可達83.85%,結(jié)團率僅為3.35%,其他參數(shù)也均能滿足高通量單細胞測序研究相關實驗要求。

利用人骨組織解離試劑盒制備的單細胞懸液質(zhì)檢結(jié)果

從曲線圖、捕獲細胞數(shù)、測序深度、獲得基因數(shù)結(jié)果初步可以看出,數(shù)據(jù)結(jié)果比較理想,例如基因中位數(shù)均在1,400個左右,較為理想。

利用人骨組織解離試劑盒制備的單細胞懸液測序數(shù)據(jù)結(jié)果

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