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抗體特異性驗證方法有什么?

閱讀:1103      發布時間:2023-12-4
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抗體特異性驗證方法有什么?

抗體特異性從始至終備受重視,那么你知道抗體特異性驗證方法有什么嗎?讓我們一起來看看吧!

一、RNA 干擾(RNA Interference)

RNA 干擾是與靶基因序列同源的雙鏈 RNA(dsRNA)所誘導的一種特異性基因沉默,可以迅速阻斷基 因活性。siRNA(Small Interfering RNA)  是一種小 RNA 分子(大約 21-25 核苷酸) siRNA 只降解與其序列互補配對的 mRNA, 其調控的機制是通過互補配對來降低相應靶位基因的表達,所以是一種典型的負調控機制。

在抗體特異性檢測中,可以通過這種“基因敲降"的方法來驗證目標蛋白表達量降低時,抗體與抗原發生結合產生的目的條帶 是否會消除或降低。

二、基因敲除(Knock OutKO)

基因敲除是一種遺傳工程技術,敲除目的基因,產生目的蛋白不表達的陰性樣品,從而使部分功能喪失, 并可進一步對生物體造成影響,進而推測出該基因的生物學功能。在抗體特異性檢測中,可以通過這種“基因敲除"方法來驗證目標蛋白缺乏時,抗體是否會發生非特異性結合。

三、天然陰性樣本

天然陰性樣本是指部分蛋白質存在組織、細胞特異性,可以利用天然不表達的細胞或組織作為陰性對照:如 CD20 不在 T 細胞中表達,PAX8 不 在 Hela 細胞中表達。此外,某些蛋白質在特定的生理條件下才表達,或降低表達,或表達量的改變,也可以作為特異性的參考依據。

四、酶法檢測

適用于修飾蛋白的抗體驗證。蛋白質通常會有一些修飾形式,如磷酸化,糖基化等,可以通過檢測修飾前后 western blot 條帶的變化來判斷抗體的特異性, 這時候就需要添加相應的酶來去除這些修飾形式,如磷酸酶,糖苷酶等。酶法檢測是驗證抗體特異性的較為迅速簡便的方法。

更多有關抗體特異性的驗證方法,請聯系天津益元利康生物科技有限公司。


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