在實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。那么你知道直接法與間接法的ELISA檢測原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！
一、直接法原理
直接法是利用包被抗原，檢測抗體或者進(jìn)行重組蛋白的活性驗證，利用蛋白與板材（即微孔板底）通過疏水鍵、流水/離子鍵的被動吸附,通過引入其它活性基團(tuán)如氨基和碳基的共價結(jié)合，以及通過表面改性后的親水鍵結(jié)合等等，當(dāng)然也有利用親和素預(yù)包被的板材，通過親和素與生物素的共價結(jié)合及親和素有四個殘基理論可結(jié)合個生物素的特性，使結(jié)合的蛋白更多，靈敏度進(jìn)一步提高，目前只是該方法的成本會升高。
直接法相對來說靈敏度和特異性較其他方法低，目前使用較少，通常用于重組蛋白或重組抗體的結(jié)合活性驗證。而使用親和素包被的板材主要原因在于大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，當(dāng)然好的板材也是成功的一半，聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能。各方面表現(xiàn)較為均衡，是ELISA 反應(yīng)中常用的固相載體。小分子蛋白由于吸附性較差，固使用這樣間接包被的形式才能起到理想的固定形式。
二、間接法原理
間接法相對直接法，靈敏度進(jìn)一步提升，利用一抗與抗原的特異結(jié)合，再加入通用二抗（即檢測抗體），如一抗使用的抗某蛋白的鼠抗，二抗可使用鼠/兔等抗該類型抗體（IgG）的抗體，利用抗體的特異性識別，加之顯色用的二抗非直接與抗原結(jié)合，所以稱之為間接檢測，該方法一般用于抗體的檢測，如重組抗體，或疫苗效價的檢測，咱們打疫苗的目的就是產(chǎn)生中和抗體嘛，該方法在IVD企業(yè)使用較多。
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