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液相色譜-質譜法分析中基質效應的消除辦法
液相色譜-MS分析時的基質效應客觀存在,并隨生物樣品的不同而不同。影響基質效應的因素很多,如樣品、樣品基質、樣品前處理過程、色譜條件、色譜分離效果、流動相和離子化等,故基質效應的消除或降低,首先要有合適的樣品前處理方法,其次要有分離良好的液相條件。
1 樣品前處理
改進前處理方法、純化樣品、盡可能地減少zui終提取液中的基質成分是zui有效、*地消除基質效應的方法。生物樣品的前處理方法很多,研究普遍認為利用有機溶劑蛋白質沉淀法或稀釋法處理的樣品,其基質效應明顯高于SPE或LLE方法。盡管樣品前處理過程繁瑣,但樣品純化仍是*的基質效應消除方法。
2 同位素內標
同位素內標不但可抵消質譜離子化時的基質效應,還可消除樣品前處理過程中的差異。 但同位素內標購置困難,且在多個分析物同時檢測時,由于存在極性差異,即使是同類物的同位素內標也很難抵消基質效應,造成定量結果偏差。
3 色譜分離
合適的色譜分離也可降低基質效應。采用柱后注射法確定基質效應的出現(xiàn)時間,即可調整色譜條件,使分析物避免在此段時間內出峰。此方法在高通量分析時無法使用,但可用快速梯度的方法將分析物與溶劑分離。
4 質譜分析
基質效應隨離子源、離子化模式和儀器的不同而不同。修正質譜分析是一種比較易行的方法,無需改變樣品的前處理和色譜條件。雖然APCI同樣存在基質效應,但是對于特定的化合物,特別是對于蛋白質沉淀法處理的樣品,若采用ESI有明顯的基質效應,但可能該基質并不影響APCI的離子化。另外,APPI因其離子化機制不同于APCI和ESI,也不會產生相似的基質效應。 LC-MS/MS分析時應采用相同基質的標準物質添加以校正,以使結果更準確。Mei等經考察后認為應盡可能使用同一牌子的塑料管,避免使用肝素鋰管抗凝,以減少基質效應影響。