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細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

閱讀:1124      發(fā)布時(shí)間:2023-9-25
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細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。
細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟:(供參考)
吸走多余培養(yǎng)基,加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞;
吸干凈PBS后加入1mL0.25%胰酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細(xì)胞表面,培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化;(細(xì)胞對(duì)于消化比較敏感,消化過度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài),導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時(shí)即可終止,禁止消化到細(xì)胞漂浮。混勻細(xì)胞時(shí)盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)
加入6-8ml培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹下細(xì)胞混勻;
將混勻的細(xì)胞1000rpm(約150g)離心3min,棄上清,再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)(建議T25瓶加10-12ml培養(yǎng)基,10cm皿加12-15ml);傳代比例: 不同細(xì)胞生長速度不一,具體傳代比例視細(xì)胞生長速度而定,大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代,生長較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。
細(xì)胞冷凍保存:
1.凍存液:92%培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇)。
2.降溫步驟:4度10min,-20度2h,-80過夜后液氮保存。

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