血磷濃度檢測試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
血磷主要指血中的無機(jī)磷，以無機(jī)磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關(guān)系密切，在以mg/dL表示時(shí)，二者的乘積(［Ca］×［P］)為30～40。當(dāng)(［Ca］×［P］)>40，則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨組織；若(［Ca］×［P］)<35則妨礙骨的鈣化，甚至可使骨鹽溶解，影響成骨作用。血鈣和血磷含量的相對穩(wěn)定依賴于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對平衡。上述平衡受到維生素D3、甲狀旁腺素和降鈣素等激素的調(diào)節(jié)。
測定原理：
去除血清中有機(jī)磷后，無機(jī)磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸，被硫酸亞鐵還原后呈藍(lán)色，在620nm有光吸收；通過測定620 nm吸光度，計(jì)算血液中磷含量。
自備儀器和用品：
離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。
試劑組成和配置：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體1.6mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前配制，依次加入11mL蒸餾水充分溶解，再加入試劑二，充分混合。
標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1支，1 mmol/L無機(jī)磷，4℃保存。
血磷濃度測定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到620 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 取出標(biāo)準(zhǔn)液，室溫解凍。
3. 血清預(yù)處理：吸取50 μL血清，加950μL試劑一，混勻后室溫8000rpm，離心10min，取上清液，待測。
4. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL蒸餾水，50μL試劑一，100μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度，記為A空白管。
5. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL標(biāo)準(zhǔn)液，50μL試劑一，100μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
6. 測定管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL上清液，50μL試劑一，100μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度，記為A測定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
血磷濃度計(jì)算：
血磷含量（mmol/dL）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)×V樣總=2×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
C標(biāo)準(zhǔn)液：1 mmol/L；樣品稀釋倍數(shù)：（50 μL血清+950μL試劑一）÷50 μL血清=20；V樣總：100 mL=0.1 L。
注意事項(xiàng)：
1、 試劑三需臨用前配制，如未用完，4℃保存，最多可使用3天；
2、 測定過程中，應(yīng)盡量避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞中有機(jī)磷酯進(jìn)入血清后可被酶水解而使得血清無機(jī)磷含量增高。
3、 Z低檢出限為10μmol/L。
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優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
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WORD 文檔 |
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