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土壤芳基硫酸酯酶(Solid-aryl sulfatase,S-ASF)試劑盒說明書

閱讀:425      發(fā)布時(shí)間:2023-09-22
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土壤芳基硫酸酯酶(Solid-aryl sulfataseS-ASF)試劑盒說明書

                                          微量法100/48

 

 

   正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

土壤芳基硫酸酯酶來自于土壤微生物,能酶促土壤有機(jī)硫化物轉(zhuǎn)化為植物可吸收的無機(jī)態(tài)硫,在硫素的生物化學(xué)循環(huán)和植物的硫營養(yǎng)代謝中具有重要的作用,是反映土壤質(zhì)量的一個(gè)重要生物學(xué)指標(biāo)。

 

測(cè)定原理:

S-ASF能夠催化對(duì)-硝基苯硫酸鉀生成對(duì)-硝基苯酚,后者在410nm有特征光吸收。

 

自備用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:甲苯5mL×1瓶,4保存(自備);

試劑二:液體20mL×1瓶,4保存;

試劑三:粉劑×2支,-20保存;臨用前加入1.25mL蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20保存;

試劑四:液體5mL×1瓶,4保存;

試劑五:液體20mL×1瓶,4保存;

 

樣品處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。

 

測(cè)定步驟:

 

試劑名稱

測(cè)定管

對(duì)照管

風(fēng)干土樣(g

0.05

0.05

試劑一(μL

12.5

12.5

振蕩混勻,使土樣全部濕潤,室溫放置15min

試劑二(μL

200

200

試劑三(μL

50


蒸餾水(μL


50

混勻, 37水浴1h

試劑四μL

50

50

試劑五μL

200

200

充分混勻,室溫靜置2min后,10000g 25℃離心10min,取200μL上清液于410nm處測(cè)定吸光值A計(jì)算

 

ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

 

S-ASF活力計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0066x -0.013x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y為吸光值。

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。

S-ASF活力(μmol/d /g 土樣)= (ΔA+0.013) ÷0.0066×V反總÷W÷T =19.09×(ΔA+0.013)

T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24dV反總:反應(yīng)體系總體積:2.625×10-4 LW:樣本質(zhì)量,0.05g

 

b.96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0033x -0.013x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y為吸光值。

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。

S-ASF活力(μmol/d /g 土樣)= (ΔA+0.013) ÷0.0033×V反總÷W÷T =38.19×(ΔA+0.013)

T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d V反總:反應(yīng)體系總體積:2.625×10-4 LW:樣本質(zhì)量,0.05g


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