土壤β-木糖苷酶（Solid-β- xylosidase, S-β-XYS）測定試劑盒說明書
微量法100T/48S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關鍵酶，產物木糖可作為碳源應用于微生物發酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業，比傳統的漂白法環保，具有廣泛的應用價值。
測定原理：
S-β-XYS催化對硝基苯酚-β-D-木糖苷產生對硝基苯酚，對硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰，測定405nm光吸收增加速率，可計算S-β-XYS活性。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體1mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
約0.1g鮮土或風干土樣，加入1mL提取液進行冰浴勻漿，室溫振蕩提取30min，然后10000g，4℃，離心10min，取上清待測。
測定操作表：
1、 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長至405nm。
2、 操作表
對照管 | 測定管 | |
樣本（μL） | 40 | 40 |
試劑一（μL） | 10 | |
試劑二（μL） | 80 | 70 |
混勻，45℃水浴20min | ||
試劑三（μL） | 80 | 80 |
混勻，靜置5min，405nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。 | ||
β-木糖苷酶活性計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x為標準品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA。
酶活定義：每克土樣每天催化產生1μmol對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土樣）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=16.33×(ΔA-0.0011)÷W
V樣總：加入提取液體積，1mL； V反總：反應總體積，0.12mL；V樣：反應中樣品體積，0.04mL； W：樣品質量，g；T：反應時間，20min=1/72d；
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=6.613x+0.0011，R2=0.9998；x為標準品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA
酶活定義：每克土樣每天催化產生1μmol對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土樣）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=32.66×(ΔA-0.0011)÷W
V樣總：加入提取液體積，1mL； V反總：反應總體積，0.12mL；V樣：反應中樣品體積，0.04mL； W：樣品質量，g；T：反應時間，20min=1/72d；
ΔA控制在0.01-1范圍內，若ΔA大于1，可適當減小樣本量。
標準曲線線性范圍為：0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。
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