酸性土壤速效磷試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷組分，包括全部水溶性磷、部分吸附態磷及有機態磷，土壤中速效磷是限制植物生長主要因子之一。
測定原理：
用雙酸法提取酸溶性磷和吸附態磷，用鉬銻抗比色法測定。
自備實驗用品及儀器：
天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體6mL×1支，4℃保存。
試劑二： 粉劑×1支，4℃避光保存。臨用前加2mL蒸餾水溶解。用不完的試劑4℃保存。
試劑三： 粉劑×3支，4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解。現配現用。
樣本處理：
新鮮土樣風干，過30-50目篩，按照土壤質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g土樣，加入1mL提取液），振蕩提取30min，10000g ，25℃離心10min，取上清液待測。
測定步驟：
1、 取試劑三一支，加入1mL蒸餾水充分溶解待用。
2、 顯色液的配制（可測50個樣）：取EP管一支，加入660μL試劑一，再加入100μL試劑二，充分混勻后，再加入240μL試劑三，充分混勻待用；配好的顯色液應為黃色，若變藍則為磷污染；顯色液必須現配現用；若一次性測不了50個樣，可按比例縮小各試劑體積。
3、 操作表
空白管 | 測定管 | |
樣本（μL） | 40 | |
提取液（μL） | 40 | |
顯色液（μL） | 20 | 20 |
H2O（μL） | 140 | 140 |
充分混勻，25℃靜置30min | ||
于微量石英比色皿/96孔板中，蒸餾水調零，測定660nm處吸光值A，分別記為A空白管和A測定管，△A=A測定管-A空白管。空白管只要做一管。 | ||
計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y =0.1252x-0.0041，R2 = 0.9957，x為標準品濃度（mg/L），y為吸光值。
速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.0041）÷ 0.1252×V樣÷（W×V樣÷V樣總）
= 7.987×（△A+0.0041）÷W
V樣：樣本體積，0.04mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，約0.1g
b. 用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y =0.0626x-0.0041，R2 = 0.9957，x為標準品濃度（mg/L），y為吸光值。
速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.0041）÷ 0.0626×V樣÷（W×V樣÷V樣總）
= 15.97×（△A+0.0041）÷W
V樣：樣本體積，0.04mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，約0.1g
注意事項：
1. 配好的顯色液當天用完，變藍則不能使用。
2. ΔA線性范圍為：0.01-1.5。
3. 標準曲線線性范圍為：0.1mg/L-20mg/L。
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