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BCA法蛋白含量測定試劑盒說明書

閱讀:535      發(fā)布時間:2023-04-03
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BCA法蛋白含量測定試劑盒說明書

                                           微量法100T/96S

 

    正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定

測定意義:

樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。

 

測定原理:

堿性條件下,蛋白質中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵,能將Cu2+還原成Cu+2分子的BCACu+結合,生成紫色絡合物,在540-595nm有吸收峰,562nm處吸收峰Z強。

 

自備儀器和用品:

臺式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑A:液體25mL×1瓶,4℃保存。

試劑B:液體0.5mL×1支,4℃保存。

標準品:液體2mL×1支,4℃保存。

工作液配制:臨用前請根據擬用工作液體積(樣本數×0.2mL),將試劑AB按照501的比例混合,蓋緊后充分混勻。

 

樣品中可溶性蛋白質提取:

1.        液體樣品:澄清液體樣品可以直接測定。

2.        組織樣品:按照組織質量(g:提取液體(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液自備,根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水

冰浴勻漿,10000rpm4離心10min,取上清,即待測液。

3. 細菌、細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000rpm4,離心10min,取上清置于冰上待測。

 

測定操作:

1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min,調節(jié)波長到562 nm,蒸餾水調零。

2. 工作液置于60℃水浴預熱30 min


空白管

標準管

測定管

蒸餾水(μL

4



標準品(μL


4


待測液(μL



4

工作液(μL

200

200

200

混勻后置于60℃保溫30min,于微量玻璃比色皿/96孔板,于562nm處測定吸光值A,分別記為A空白管、A標準管、A測定管。

 

注意:空白管和標準管只需要做一次。

 

計算公式:

Cpr (mg/mL)= C標準品×A測定管-A空白管)÷A標準管-A空白管)

           =0.5×A測定管-A空白管)÷A標準管-A空白管)

Cpr (mg/g 鮮重)= C標準品×A測定管-A空白管)÷A標準管-A空白管)÷ W

           =0.5×A測定管-A空白管)÷A標準管-A空白管)÷ W

W: 樣本質量,g

 

注意事項:

BCA法蛋白含量測定試劑盒,適用于測定蛋白濃度在20-5000μg/ml樣品。測定前取1-2個樣做預實驗,若A測定管-A空白管﹥1.5,需將樣本用提取液稀釋后再測定,以確保測定的準確性。

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優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司

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