一、實(shí)驗(yàn)介紹

Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓（1-Methoxy PMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazan dye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

　　1．藥物（也包括其他處理方式如放射線照射）對體外培養(yǎng)的細(xì)胞毒性的測定；

　　2．細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測定。

三、實(shí)驗(yàn)步驟

四、送樣運(yùn)輸要求：

1 凍存細(xì)胞

凍存管寄送前，使用封口膜把凍存管口封嚴(yán)密，凍存管單獨(dú)用自封袋存放。干冰運(yùn)輸。運(yùn)輸時間在2天以內(nèi)干冰用量在10kg，在2-4天，干冰用量在20kg。

2 活細(xì)胞

1. 使用T25瓶，瓶蓋無孔。

2. 生長狀態(tài)良好的細(xì)胞，細(xì)胞密度在30%-40%為宜，寄送前，移去瓶內(nèi)舊培養(yǎng)基，添加新培養(yǎng)基至瓶頸部，保留微量空氣，擰緊瓶蓋，并用封口膜密封，瓶身用75%表面消毒，把瓶用無菌袋或自封袋包裝，然后放置在適當(dāng)?shù)暮袃?nèi)，盒周圍用棉花等做防震防壓處理。當(dāng)溫度低于10度是要加保溫措施，如暖寶寶等。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)條件備注完整，如培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度，F(xiàn)BS用量等。

4. 備注：運(yùn)送時間原則在4天以內(nèi)，如細(xì)胞生長速度快，則加入的培養(yǎng)基血清可以減半，細(xì)胞密度在20%-30%。