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【熱點應(yīng)用】動物源食品中硝基呋喃的檢測工作流程
硝基呋喃類藥物是一種人工合成的廣譜抗生素，主要包括呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因等，曾廣泛應(yīng)用于畜禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。但研究發(fā)現(xiàn)呋喃西林、呋喃唑酮及其代謝物 3-氨基-2-惡唑酮（AOZ）等具有致癌作用。
歐盟已于 1995 年禁止在食用動物中使用硝基呋喃類藥物，我國也于 2002 年頒布了禁止使用該類獸藥的禁令。2022 年 10 月 27 日，海關(guān)總署緊急下達了輸歐盟動物源性食品執(zhí)行新殘留限值標準，硝基呋喃代謝物檢測增加了硝呋索爾代謝物，總共 5 種代謝物的測定限為 0.5 μg/kg。硝呋索爾和其他硝基呋喃類藥物類似，其本體和代謝物均具有很強的生物毒性，但母體易在動物組織中快速降解，同時代謝物易與蛋白結(jié)合，形成穩(wěn)定的結(jié)合態(tài)殘留物，因此通常將代謝物作為硝基呋喃類藥物殘留的標示物來反映其用藥情況。目前檢測標準均未同時覆蓋所有 5 種硝基呋喃類代謝物。
樣品前處理流程
圖 1. 豬肉和豬肝樣品 5 種硝基呋喃類代謝物前處理操作流程
液相色譜條件
質(zhì)譜條件
表 1. 5 種硝基呋喃代謝物 MRM 參數(shù)
注：*為定量離子
Captiva EMR-Lipid 脂肪去除效果
使用鹽酸溶液水解后，豬肉和豬肝中含有的較多脂肪也會游離出來， Captiva EMR-Lipid 是安捷倫專有卓效去除脂質(zhì)的通過式凈化的產(chǎn)品，圖 2 顯示了 Captiva EMR-Lipid 凈化前后，采用 184+ 母離子掃描方式對樣品進行磷脂殘留監(jiān)測，從圖中明顯可以看出相比于未凈化，Captiva EMR-Lipid 凈化后樣品基質(zhì)中絕大多數(shù)的磷脂干擾物都可以得到有效去除，由此可獲得更干凈更徹底的凈化效果，從而能夠更好的保護色譜柱和儀器。
圖 2. Captiva EMR-Lipid 方法（綠色）凈化與未凈化（紅色）相比的脂質(zhì)殘留監(jiān)測對比
圖 3. 5 種硝基呋喃類代謝物外標與內(nèi)標的疊加 MRM 譜圖
檢測限和定量限
通過空白基質(zhì)加標回收實驗來確定方法的檢測限和定量限。當加標濃度為 0.5 µg/kg 時，5 種化合物均可定性檢測，且目標化合物峰的信噪比（S/N）均大于 3，由此確定該方法的檢測限為 0.5 µg/kg；當加標濃度為 1 µg/kg 時，S/N 均大于 10，且回收率和重復(fù)性均能滿足相關(guān)國家標準要求，由此確定該方法的定量限為 1 μg/kg。
加標回收率和精密度
本文選擇了兩種動物源基質(zhì)（豬肉、豬肝），并在 1、2、10 μg/kg 三個濃度水平下做加標回收試驗，每個水平做 6 個平行，結(jié)果列于表 2 中。從表中可以看出，各目標化合物的平均加標回收率和相對標準偏差分別在 77.4%–111.0% 和 4.3%-14.6% 之間，均能滿足相關(guān)國家標準要求，表明本文所開發(fā)的方法具有良好的準確度和精密度。豬肉和豬肝空白和加標樣品的 MRM 色譜圖見圖 3。
表 2. 5 種硝基呋喃代謝物在豬肉和豬肝中的加標回收率結(jié)果
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