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在細胞培養中常見的問題以及解決辦法
閱讀：386 發布時間：2022-6-7
在實驗室培養細胞用于研究和生物制劑生產并非易事。它需要在許多領域取得成功，包括優化培養基和條件、適當的設備、良好的技術和有效的協議。細胞培養基優化在提高生產力、確保細胞生長和健康方面起著至關重要的作用，甚至是影響關鍵質量屬性的杠桿。因此，細胞培養科學家在促進現有和新治療方法的發現和生產方面起著至關重要的作用。
細胞培養作為*的工具，從20世紀出現至今經歷了巨大的變化。從60多年前基礎培養基DMEM的誕生到今天細胞培養成為生物醫藥、組織工程和再生醫學主流研究中*的部分，難以想象，如果沒有了細胞培養技術，生命科學研究將會是什么樣子。
很多人都繞不開養細胞這個坎，稍不留神，就給我們造成內心陰影面積三室一廳。不是栽在細胞污染上，就是活力不好，怎么避免細胞不明不白的掛掉？我們來看一下。
培養細胞死亡的原因有哪些？
1.培養箱內無 CO2
2.培養箱內溫度波動太大
3.細胞凍存或復蘇過程中損傷
4.培養液滲透壓不正確
5.培養液種有毒代謝產物堆積
遇到以上問題該如何應對？
1.檢測培養箱內 CO2
2.檢查培養箱內溫度
3.取新的保存細胞種
4.檢測培養液滲透壓。注意：大多數哺乳動物細胞能耐受滲透壓為 260~350 mOsm/kg。加入額外試劑如 HEPES 或藥物都有可能影響培養液滲透壓。
5.換入新鮮培養液
而細胞培養做為生物學研究最基礎的技術之一，可以說是滲透科研界的方方面面。工欲善其事，必先利其器。細胞好不好，就看你懂不懂細胞培養的各種技術了。
一：原代培養
從原代組織中分離細胞的常用的方法是酶解法（胰蛋白酶和膠原酶）。
用無菌的解剖刀和剪子將組織剪成3~4mm小片，用平衡液（無鈣鎂離子）清洗組織碎片后去除上清液，并加入0.25%的胰蛋白酶（Trypsin，100mg組織加入1ml胰蛋白酶）或者膠原酶（Collagenase，50~200單位/ml），孵育4-18h。離心取上清后，用平衡液清洗幾次后，用*培養基懸浮細胞，進行培養。
二：傳代培養
依據細胞生長的特點，傳代方法有3種：
1. 懸浮生長細胞傳代（離心法）
將懸浮細胞離心（1000 rpm， 3 min）去上清，收集沉淀物加新培養基，混勻后進行傳代培養。
2. 半懸浮生長細胞傳代（直接吹打法）
此類細胞（如Hela細胞）部分貼壁，但黏貼不牢，可用直接吹打法使細胞從瓶壁上脫落下來，進行傳代。
3. 貼壁生長細胞傳代（酶消化法）
去除瓶內培養液后，加入1-2ml 0.25%的胰蛋白酶液（以消化液覆蓋整個瓶底為準）37℃靜置2-10min（顯微鏡下動態監測）。移去蛋白酶液，加入培養液反復吹打瓶壁細胞，離心將細胞沉淀用培養液制成細胞懸液。吸取1/10—1/40細胞懸液，接種于含有適量新鮮培養液的新培養瓶中進行傳代培養。