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原代細胞分離培養(yǎng)

原代細胞(primary cell)是指從生物體獲取細胞直接培養(yǎng)。常用的原代細胞分離培養(yǎng)方法有組織塊培養(yǎng)和分散組織培養(yǎng)。

組織塊培養(yǎng)：是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上，加入培養(yǎng)基后進行培養(yǎng)。

組織塊培養(yǎng)法是常用的、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。將組織塊剪切成小塊后，接種于培養(yǎng)瓶，組織小塊貼壁24h或更長時間后，細胞就從組織四周游出。但由于在反復剪切和接種過程中對組織塊的損傷，并不是每個小塊都能長出細胞。用于組織塊培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶可根據(jù)不同細胞生長的需要作適當處理，如：預先涂以鼠尾膠原薄層，以利于上皮樣細胞等的生長。

分散組織培養(yǎng)：是將組織塊從機體中取出離散成單個細胞，置于合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖。分散組織培養(yǎng)也是常用的一種原代細胞培養(yǎng)方法，通常用機械法或化學法將組織塊分散為單細胞。如欲從胎兒或新生兒的組織分離到活性較好的游離細胞，經(jīng)典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和膠原酶)消化細胞間的結(jié)合物，或用金屬離子螯合劑(如EDTA)除去細胞互相粘著所依賴的Ca2+，再經(jīng)機械輕度振蕩，使之成為單細胞。

注意事項：

1. 取材的組織要盡快培養(yǎng)。如若不能及時培養(yǎng)，可將組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi)，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果組織塊很大，應(yīng)切成1cm3以下的小塊再低溫保存，但時間不能超過24h。

2. 從消化道、周圍有壞死組織等污染因素存在的區(qū)域取材，可用含500～1000u/ml的青-鏈霉素BSS液漂洗5～10min，或用10%達克寧注射液沖洗浸泡10min再作培養(yǎng)。

3. 組織塊不易貼壁，可預先在瓶壁涂薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。

4. 原代培養(yǎng)的1～2d內(nèi)要特別注意觀察是否有細菌、真菌、霉菌的污染，一旦發(fā)現(xiàn)，要及時清除。

原代細胞在細胞學研究、遺傳學研究、腫瘤研究、藥物篩選、細胞移植、類器官培養(yǎng)等眾多研究領(lǐng)域備受歡迎，且原代細胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用市場前景廣闊。

細胞生物學檢測：

• 2D細胞培養(yǎng)和觀察
• 3D細胞培養(yǎng)和觀察
• 原代細胞分離/培養(yǎng)/鑒定
  
• 細胞增殖/毒性檢測（MTT 法/CCK8 法）
• 細胞凋亡檢測（AnnexinV FITC/PI雙染流式法/Tunel法）
• 細胞周期檢測（PI染料標記流式法）
• 細胞遷移/侵襲檢測（劃痕法/Transwell法）
• 流式細胞分選（流式細胞術(shù)）
• 細胞免疫熒光檢測
• 小管形成實驗（tube formation，體外血管生成實驗）

• 細胞克隆形成實驗

• 細胞外泌體分離與鑒定
• 慢病毒包裝及穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選
• 電生理檢測
• 個性化細胞實驗（藥物篩選等）
  細胞模型已經(jīng)于人類疾病研究和治療藥物的篩選領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。我司可根據(jù)客戶的具體方案提供多種細胞模型的構(gòu)建及相應(yīng)的細胞生物學功能檢測。

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公司簡介  上海昆盟生物科技有限公司 (Coweldgen Scientific Co.,LTD) 是一家專注于生命科學領(lǐng)域提供相關(guān)試劑產(chǎn)品和服務(wù)的生物高科技企業(yè)，坐落于上海聚科生物產(chǎn)業(yè)園。公司提供種類齊全的細胞系和多種原代細胞、質(zhì)量穩(wěn)定的細胞培養(yǎng)試劑產(chǎn)品、成熟高效的技術(shù)服務(wù)。本著“守正創(chuàng)新，科學嚴謹"的理念，我們以高標準塑造行業(yè)品牌，以全新視野構(gòu)建現(xiàn)代企業(yè)，勇于探索和創(chuàng)新。公司業(yè)務(wù)范圍涉及全國各省市自治區(qū)，與國內(nèi)多家醫(yī)院、高校、科研院所、生物科技公司建立了良好的合作關(guān)系，贏得了良好的市場聲譽和廣泛的認可，我們保證將繼續(xù)為廣大科研用戶提供專業(yè)、高效、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)！細胞系(帶STR鑒定) | 原代細胞 | 細胞培養(yǎng)基 | 血清 | 細胞培養(yǎng)添加因子 | 標記細胞 | 耐藥細胞 | 生化檢測試劑盒 | WB試劑 | 抗體 等；ATAC-seq分析 | ChIP-seq分析 | 16S rRNA測序分析 | Pull down實驗 | RIP 實驗 | ChIP實驗 | Co-IP實驗 | 質(zhì)譜檢測 | WB檢測 | PCR檢測 | 細胞培養(yǎng)/增殖/凋亡/周期/遷移/侵襲/自噬 | 活體成像 | 免疫組化 | 電鏡檢測 | micro-CT 檢測  等。更多信息，歡迎垂詢上海昆盟生物科技有限公司。