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細胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒——CCK8

一、包裝規格

貨號：K009-100、 K009-500、K009-1000、K009-3000

規格： 100T 、 500T 、 1000T 、 3000T

儲存條件: 4℃避光保存，有效期一年。

二、產品說明

Cell Counting Kit 簡稱 CCK 試劑盒，為 MTT 法的替代方法，是一種基于 WST（水溶性四唑鹽，化學名：2-(2-甲 氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

CCK 法與其它檢測方法之間的比較：

CCK 用途：藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定等

三、操作說明

Ⅰ、制作標準曲線（測定細胞具體數量時）

1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。

2、按比例（例如：1/2 比例）依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做 3-5 個細胞濃度梯度，每組 3-6 個復孔。

3、接種后培養 2-4 小時使細胞貼壁，然后加 CCK 試劑培養一定時間后測定 OD 值，制作出一條以細胞數量為橫坐標（X 軸），OD 值為縱坐標（Y 軸）的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量（試用此標準曲 線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入 CCK 后的培養時間。）

Ⅱ、細胞活性檢測

1、在 96 孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養板放在培養箱中預培養（在 37℃,5% CO2 的條件下）。

2、向每孔加入 10 μL 的 CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數）。

3、將培養板在培養箱內孵育 1-4 小時。

4、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。

5、如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶 液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發生變化。

Ⅲ、細胞增值-毒性檢測

1、在 96 孔板中配置 100μL 的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養 24 小時（在 37℃，5% CO2 的條件下）。

2、向培養板加入 10μL 不同濃度的待測物質。

3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間（例如：6、12、24 或 48 小時）。

4、向每孔加入 10μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數）。

5、將培養板在培養箱內孵育 1-4 小時。

6、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。

7、如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶 液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發生變化。

注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加 CCK 之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

備注：

①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入 CCK 試劑后的培養時間。

②有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔減的差異。加入 CCK 試劑時， 建議斜貼著培養板壁加，不要插到培養基頁面下加，容易產生氣泡，會干擾 OD 值讀數。

③白細胞可能需要培養較長時間。

④當使用標準 96 孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為 1,000 個/孔 (100 μL 培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于 2,500 個/孔 (100 μL 培養基)。如果 要使用 24 孔板或 6 孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的 10% 加入 CCK 溶液。

⑤如果沒有 450nm 的濾光片，可以使用吸光度在 430-490 nm 之間的濾光片，但是 450nm 濾光片的檢測靈敏度最高。

⑥培養基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

活力計算： 細胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0 加藥）-A（空白）] ×100

A（加藥）：具有細胞、CCK 溶液和藥物溶液的孔的吸光度 A（空白）：具有培養基和 CCK 溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A（0 加藥）：具有細胞、CCK 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力 保存條件：4℃干燥避光保存，有效期一年。

僅供科學研究使用，禁止用于它用。

細胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒系列貨號規格：

Zeta Life介紹：
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深圳市安培生物科技有限公司是美國 Zeta Life 公司的中國深圳地區總代理。精心經營細胞培養品試劑，均經過反復充分驗證，產品效果好且重復性佳。尊敬的客戶您如在訂購過程中遇到任何問題都可以與我司在線客服聯系尋求幫助。