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lncRNA 的生物學功能（二）2023/6/27
一）lncRNA對于細胞周期及凋亡的調控作用有研究報道，lncRNA可以通過調節細胞周期和凋亡的方式，來影響細胞的增殖。例如，Gas5（growtharrest-specific5，非編碼RNA）在細...
lncRNA 的生物學功能（一）2023/5/17
（一）lncRNA對于細胞周期及凋亡的調控作用有研究報道，lncRNA可以通過調節細胞周期和凋亡的方式，來影響細胞的增殖。例如，Gas5（growtharrest-specific5，非編碼RNA）在...
構建載體2023/5/5
構建載體最關鍵的一步就是設計引物引入酶切位點，一旦引物設計好，那接下來就非常簡單了，今天重點就來教教大家如何利用snapgene輕松獲得構建載體所需的引物序列。1.打開軟件，選擇第一個（紅線標記），然...
引物設計原則2023/5/5
1）擴增產物長度100bp-150bp為佳；2）引物長度17bp-25bp最好；3）正向引物和反向引物的Tm值最好相差不要超過1℃。Tm值調整至60℃-65℃為佳；4）引物的GC含量控制在40%-60...
PCR 操作中必知的 6 大細節2023/5/5
1、最好使用一次性進口tip頭，以避免液體殘留；同時，tip頭不要長時間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染。2、加樣時，tip頭要伸入PCR反應管的液面下一點，然后將液體緩緩打入液面下，至恰好打出一個小氣...
PCR 引物設計2023/5/5
好的引物會讓PCR實驗成功一半，因而，引物設計一直都是PCR非常重要的環節。經典之法就是讓Premier5攜手oligo，共同設計PCR引物。1、以小鼠的IL-17為例，進入NCBI界面,選擇Nucl...
PCR 產物純化2023/4/21
材料與儀器TE或去離子水PCR產物離心機和轉子PCR濾件微量離心管步驟一、材料1.緩沖液和溶液TE(lOmmol/LTris-HCl，lmmol/LEDTA，pH7.5)或去離子水2.核酸和寡核苷酸待...
DNA 污染的柱上去除2023/4/21
材料與儀器DNA酶I緩沖液DNA酶I細胞裂解液步驟一、材料1.酶和酶緩沖液DNA酶I，擴增級（無RNA酶）DNA酶I緩沖液，10X2.細胞和組織利用總RNA純化試劑盒（例如Madigen總RNA快速純...
冷凍組織及切片的準備2023/4/21
材料與儀器1、新鮮的組織2、丙酮蒸餾水干冰磷酸鹽緩沖液（PBS)TekOCT組織復合物3、封閉容器燒杯恒冷裝置解剖工具平盤組織模子載玻片刀片步驟一、材料1.緩沖液、溶液和試劑丙酮蒸餾水干冰磷酸鹽緩沖液...
單鏈 cDNA 的合成2023/4/21
材料與儀器步驟一、材料1.緩沖液、溶液和試劑去除RNA酶的雙蒸水10XRT-PCR緩沖液（去除RNA酶的雙蒸水，100mmol/LTris-HCl、pH8.3，500mmol/LKC1,15mmol/...
從有限的細胞中提取 RNA2023/4/21
材料與儀器LCM帽子乙醇糖原RNA提取試劑盒超純水移液器步驟一、材料1.緩沖液、試劑和溶液75%乙醇(超純水配制）糖原，5mg/ml(Ambion，Austin，TX)StratageneRNA提取試...
細胞融合的方法及誘導物2023/4/19
同種細胞在培養時2個靠在一起的細胞自發合并，稱自發融合;異種間的細胞必須經誘導劑處理才能融合，稱誘發融合。仙臺病毒法融合①兩種細胞在一起培養，加入病毒，在4℃條件下病毒附著在細胞膜上。并使兩細胞相互凝...
大腸桿菌質粒DNA的提取2023/4/19
實驗方法原理堿法提取主要是利用共價閉合環狀質粒與線性染色質在拓撲學上的差異來分離它們。在堿性pH環境，DNA變性，當恢復中性并在高鹽離子濃度時，絕大多數質粒DNA可以準確復性，留在上清中；而線性染色體...
蛋白酶活性檢測方法2023/4/19
1定義1g固體酶粉(或1mL液體酶)，在一定溫度和PH值條件下，1min水解酪素產生1ug酪氨酸為一個酶活力單位，以(u/mL)表示。2福林法(第一法)2、1原理蛋白酶在一琿的溫度與PH條件下，水解底...
植物蛋白質組學和糖基化2023/4/19
1.前言與其他真核細胞一樣，植物細胞中，糖基化通常發生在分泌蛋白質上，雖然在細胞質蛋白和核蛋白上也發現一些糖基化反應。根據寡糖部分和蛋白質骨架之間的連接方式，可將糖基化分為兩種類型：N-糖基化和O-糖...
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