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細胞爬片免疫組化染色實驗步驟

時間:2024/1/22閱讀:1082
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原理:

免疫組織化學技術:檢測組織原位表達的肽類、激素、神經遞質、細胞因子、受體、表面抗原等抗原性物質。


(一)組織和細胞標本的準備

  1. 組織標本的取材-取材新鮮,固定及時,形態完好。


  2. 細胞標本的準備

(1)活體細胞標本:印片法、穿刺吸取法、沉淀法


(2)培養細胞標本:

細胞涂片: 將細胞制成懸液(10^6)涂在 涂有切片粘合劑的載玻片上,晾干后固定(細胞甩片)。

②細胞爬片: 將細胞直接培養在蓋玻片上 將細胞直接培養在6孔或9孔板上。

3.固定

(1)保持形態:終止和抑制外源性和內源性酶活性,防止 組織細胞的死后變化,防止自溶和腐敗,保持組織細胞的固有形態。

(2)保存抗原使細胞內的蛋白質、脂肪、糖和酶等各種抗原成份轉變成不溶性物質,以保持它原有的結構和定位與生活時相仿。

(3)硬化作用:固定劑兼有硬化作用、使組織硬化、增加組織硬度、便于制片。

(4)便于觀察:使組織中的各種物質沉淀和凝固起來而產生不同的折射率,造成光學差異,以便染色后易于鑒別和觀察;經過固定的組織能對染料產生不同的親和力而著色清晰,便于辨認。

注意事項:

①防止脫片:玻片預處理(多聚賴氨酸)、溫和操作。

②力求保持組織新鮮, 勿使其干燥, 盡快固定處理。

③組織塊不易過大過厚,必須小于 2cm x 1.5cm x 0.3cm,尤其是組織塊厚度須保持在0.3cm 以內。

④固定劑必須有足夠的量,在體積上一般大于組織20倍。

⑤組織固定后, 應充分水洗,去除固定劑,以減少固定劑造成的人為假像。

(三)細胞爬片的免疫組化染色

1. 取出細胞爬片,迅速置入冷丙酮固定 20 ~30 分鐘。

2. 蒸餾水浸泡 5 分鐘,2 次。

3. 打孔液浸泡 5 分鐘。

4. 蒸餾水浸泡 5 分鐘,2 次。

5. 后接前述實驗步驟的第 6 步(正常血清封閉)。

注:第 3、4 步僅用于檢測細胞內抗原,檢測細胞膜抗原時不用。

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