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平滑肌細胞的分離和培養

時間:2022/12/9閱讀:1700
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料與儀器

0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液
平滑肌培養液
Petri培養皿 手術刀和10號手術刀片 解剖剪 組織鑷

步驟

1. 從小牛取胸主動脈。

2. 將胸主動脈浸入 Hanks 液。

3. 分離細胞之前將動脈放在冰上。

4. 將動脈放入 150 mm × 25 mm Petri 培養皿。

5. 用解剖剪沿長軸剪開動脈。

6. 用手術刀片輕刮動脈內腔面,以除去內皮細胞。

7. 將動脈的中膜與內膜和外膜分離。

8. 將中膜切成約 1 cm2 大小的組織塊。

9. 將中膜組織塊放入 60 mm × 15 mm Petri 培養皿,內膜側朝下。

10. 讓組織塊貼壁約 10 min。

11. 直接在組織塊上注 1 ml SMCM(平滑肌培養液(smooth muscle cell medium,SMCM):DMEM 添加 20 % FBS,100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 鏈霉素)。

12. 將組織塊放入濕潤的培養箱,在 37°C 和 10% CO2 條件下孵育。

13. 第 2 天加入 5 ml SMCM,注意勿讓組織塊去附著。

14. 將組織塊繼續孵育 10 d。此后,平滑肌細胞從組織塊遷移出來,并變為單層。

15. 細胞生長接近形成單層時,用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液傳代。


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安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶,提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產,包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務,努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業


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