成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

深圳市安培生物科技有限公司
中級會員 | 第5年

19126518388

血清系列
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
支原體清除
細(xì)胞凍存
實(shí)驗(yàn)耗材
分子試劑
細(xì)胞增殖與凋亡
Biozellen系列
培養(yǎng)基
ELISA試劑盒
TOYOBO(東洋紡)
ZYMO RESEARCH
Greiner(格瑞納)
IKA(艾卡)
化學(xué)發(fā)光底物(ECL)
PROSPEC系列
Epigentek系列
微生物檢測
細(xì)胞生物學(xué)
Corning康寧
解離試劑
細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
原代細(xì)胞
植物檢測系列試劑盒
SERANA
BSA
細(xì)胞系
生化試劑盒
環(huán)境檢測系列試劑盒(AKEN)
類器官培養(yǎng)
緩沖器和解決方案
生物三凝膠基質(zhì)
細(xì)胞因子分子
生物樣本庫
蛋白研究系列
修飾檢測試劑盒

從骨骼肌分離和培養(yǎng)單肌纖維的方法步驟

時間:2021/11/15閱讀:2163
分享:

材料與儀器

Matrigel DMEM L-谷氨酰胺 Ⅰ型膠原蛋白
青霉素和鏈霉素混合液 雞胚提取液 馬血清 胎牛血清 接種培養(yǎng)液 增殖培養(yǎng)液
Petri培養(yǎng)皿 改良Pasteur吸管 24孔培養(yǎng)板 鉆石筆 透照立體解剖顯微鏡

步驟

1. 處死動物后立即切除肌肉。注意夾持肌腱,以減少對肌纖維的損傷。

2. 將肌肉放入 0.2 % Ⅰ型膠原蛋白酶液(W / V,用 DMEM 配制),在 35°C 條件下用搖動水浴箱孵育 60~90 min。較大肌肉需要較長消化時間,一般情況下取自 6~8 周大鼠的趾長伸肌需消化 60 min 。

3. 準(zhǔn)備盛肌纖維的 Petri 培養(yǎng)皿,即用馬血清浸洗培養(yǎng)皿,以免肌纖維黏附于培養(yǎng)皿底壁上。然后,加入 20 ml DMEM。

4. 消化后將肌肉移入盛有 DMEM 的 Petri 培養(yǎng)皿。

5. 在透照立體解剖顯微鏡下,用改良 Pasteur 吸管(將 Pasteur 吸管割斷,用鉆石筆將開口弄大。然后,用火使鋸齒狀邊緣變光滑,以免損傷肌纖維)研磨肌肉,使單肌纖維分散。

用 10 % 馬血清(用 DMEM 配制)浸蘸吸管,以免肌纖維黏附吸管。

6. 肌纖維被分散時,肌肉的直徑變小。逐漸用口徑小的 Pasteur 吸管。

7. 當(dāng)分離 20~30 條肌纖維時,將肌肉移入另一 Petri 培養(yǎng)皿,繼續(xù)分離,直至分離得到足夠的肌纖維。

8. 較大肌肉需要第二次消化,以分散位于中央處的肌纖維。表淺的肌纖維被分離后,將剩余的肌肉放人膠原蛋白酶液,進(jìn)一步消化。

9. 將肌纖維放入涂有 Matrigel (1 mg/ml,用 DMEM 配制)的培養(yǎng)皿。

(a)將單肌纖維放于培養(yǎng)皿中央,讓其貼于 Matrigel。為了培養(yǎng)純單肌纖維,只放入未損傷的肌纖維,除去較皺縮部分。這些部分可能有污染的附著細(xì)胞,多為微血管段;

(b)慢慢加入接種培養(yǎng)液(DMEM,添加 10% 馬血清、0.5% 雞胚提取液、4 mmol/L L-谷氨酰胺、100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 鏈霉素),注意勿移動接種的肌纖維。

10. 將培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱,在 37°C 和 5 % CO2 條件下培養(yǎng)。

增殖

培養(yǎng) 12~24 h 后,衛(wèi)星細(xì)胞開始從肌纖維遷出。至 3~4 天,每條肌纖維周圍有 50~300 個衛(wèi)星細(xì)胞。確切細(xì)胞數(shù)取決于肌纖維來源的肌肉和小鼠周齡等多種因素 [ Bockhold et al.,1998 ] 。

11. 許多衛(wèi)星細(xì)胞從肌纖維遷出時,用 Pasteur 吸管將肌纖維吸出。應(yīng)在火焰上將吸管尖部拉細(xì)。

12. 繼續(xù)培養(yǎng)剩余的細(xì)胞。

13. 如果需要,可傳代培養(yǎng),用增殖培養(yǎng)液(DMEM,添加 20% FBS、10% 馬血清、1% 雞胚提取液、4 mmol/L L-谷氨酰胺、100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 鏈霉素)接種細(xì)胞。


會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言
主站蜘蛛池模板: 麻豆视传媒短免费网站| 爆乳啪啪无码成人二区亚洲欧美| 久久久久久久久女| 色情综合另类小说图片| 91综合色区亚洲熟妇p| 色妞AV永久一区二区国产AV开| 日本99久久九九精品无码| 亚洲精品色情婷婷在线播放| 亚洲va久久久噜噜噜久久无| 精品人妻无码一区二区三区下一页| 日本50mature成熟BBW| 亚洲精品无码国产爽快A片百度| 日本欧美一区| 69精品人人人人人人人人人| 国产亚洲综合一区柠檬导航| 国产成人亚洲综合色就色}| 秋霞伦理电影电影网| 亚州少妇无套内射激情视频| 国产精品久久人妻无码网站一区L| 日本无码黄人妻一区二区| 91精品国产蜜臀在线观看| 二级伦理片236宅宅网| 性一交一乱一美A片裸体| 亚洲A片无码一区二区三区在线| 香蕉视频色版在线观看| 亚洲精品AV中文字幕在线| 年轻的妈妈5韩国电影| 久久精品国产亚洲av高| 巨乳水多后入抽插| 岳把我用嘴含进满足我视频| 国产电影一区二区三区爱妃记| 亚洲9777精品毛A片久久久| 久久久久久久久久久艹| 蜜臀AV色欲A片无码一区| 欧洲无码八A片人妻少妇| 久久久久久久久麻豆| 国产日韩av在线观看| 欧美精品亚洲精品| 久久综合狠狠综合久久| 色情性黄10060片免费看小说| 国产欧美日韩一级片|