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難轉染細胞Thp-1高效率轉染條件分享

時間:2021/11/10閱讀:2132
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Thp-1細胞高效率轉染條件分享


一、轉染材料準備

1. 轉染試劑用量:10ul

2. siRNA濃度:20um/L

3. 細胞密度:1*106-1*105

4. 轉染用培養板:6孔板

5. 轉染試劑:Advanced DNA RNA轉染試劑;貨號:AD600150

6. 轉染時間:48小時

7. 細胞培養胎牛血清:Z7180FBS-500超低內毒素胎牛血清

8. 細胞凍存液:L0100無血清細胞凍存液.

注意:本細胞轉染用量條件不適合lipo使用。

難轉染細胞Thp-1高效率轉染條件分享

二、操作過程:

1.提前1天接種細胞:細胞匯合度在60-80%左右,再進行轉染。

2. 核酸復合物制備:將核酸與轉染試劑按照比例關系直接混合,用移液器吹打、混勻,室溫靜止15分鐘。

3.在細胞培養基中加入核酸復合物:根據參考用量在細胞中加入核酸復合物,并輕輕混勻;細胞培養基里面可以含有血清。

4.細胞換液:轉染24小時后對細胞進行正常換液,懸浮細胞轉染過程中不用換液。

5.分析結果:質粒DNA轉染48-72小時后熒光檢測轉染效率,48-96小時檢測mRNA或蛋白表達。若進行穩定表達細胞株的篩選,則在轉染后24-48小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA轉染后9小時熒光檢測轉染效率,48-72小時檢測mRNA或蛋白表達。



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